Las cepas probióticas nativas son elegidas para la producción de productos lácteos funcionales debido a que presentan ventajas tecnológicas. La selección preliminar se basa en ensayos in vitro que predicen su seguridad y propiedades funcionales. El objetivo del presente estudio fue evaluar in vitro la sensibilidad a antibióticos, el pasaje por el tracto gastrointestinal y la actividad antimicrobiana de la cepa nativa Lactococcus lactis GU967439, aislada de leche cruda proveniente de una quesería artesanal de Colonia, Uruguay. Se utilizó a L. lactis ATCC N° 11454 como referencia. L. lactis GU967439 fue sensible a todos los antibióticos activos frente a Gram positivos. Además, fue resistente a la simulación del jugo gástrico a pH 3, pancreatina y bilis. El sobrenadante libre de células de L. lactis GU967439 inhibió el crecimiento de Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus aureus ATCC 29213, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Listeria innocua ATCC 33090, Streptococcus bovis 2.5 (WT) y presentó mejor actividad que la cepa L. lactis ATCC N° 11454. Sin embargo, ninguna de las cepas inhibió a los microorganismos Gram negativos evaluados (Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027). Estos resultados dan base a futuros trabajos que permitan continuar caracterizando el potencial probiótico de L. lactis GU967439.