Esta tesis se concentra en la caracterización molecular de patógenos transmitidos por garrapatas, los cuales han cobrado una gran importancia en los últimos años debido a su impacto en la economía agropecuaria, y en la salub pública de países tanto desarrollados como en vía de desarrollo (Perez y col., 2006; Rikihisa, 2010; Aubry y Geale, 2011). Particularmente la tesis usa una combinación de herramientas moleculares, bioinformaticas y filogenéticas para estudiar la variación genética de dos importantes patógenos llamados Anaplasma marginale y Ehrlichia canis, los cuales afectan principalmente al ganado bovino y los perros domésticos respectivamente (Aubry y Geale, 2011; Zweygarth y col., 2014). Antes de introducirnos en las particularidades de estos dos patógenos, es importante resaltar la relevancia del estudio de la variación genética de los patógenos en general y de A. marginale y E. canis en particular. Esto se podría resumir brevemente diciendo que la variabilidad genética, entendida como cambios en la secuencia de ADN, constituye la base de los mecanismos de evolución (cambio en el tiempo) de los patógenos y por tanto determinará la emergencia de nuevos patógenos o nuevas cepas de patógenos existentes pero con diferentes patrones de patogenicidad, virulencia y transmisión (Palmer y Brayton, 2013). Al mismo tiempo la variabilidad genética es uno de los mecanismos por el cual los patógenos escapan la vigilancia del sistema immune, permitiendo el establecimiento de infecciones persistentes de las cuales A. marginale y E. canis son un buen ejemplo (Zhang y col., 2008; Palmer y Brayton, 2013). A. marginale y E. canis son ¿-proteobacterias de la familia Anaplasmataceae y de los géneros Anaplasma y Ehrlichia respectivamente que están ampliamente distribuidas en el mundo (Zhang y col., 2008; Aubry y Geale, 2011). Ellos son patógenos intracelulares obligatorios que se localizan en vacuolas que forman en las células infectadas de los hospederos (Blouin y Kocan, 1998; Popov y col., 1998). Estos microorganismos tienen complejos ciclos de vida los cuales están caracterizados por una transmisión continua en la cual se alternan un hospedero vertebrado (e.g. vacas y perros) y uno invertebrado (garrapatas de animales domésticos) al que se le llama vector pues pasa los patógenos de un individuo infectado a otro que puede ser sano o no (Kocan y col., 2004 ; Bremer y col., 2005). Las garrapatas del perro (Rhipicephalus sanguineus) y de la vaca (Rhipicephalus microplus) constituyen sus principales vectores invertebrados (Kocan y col., 2004 ; Bremer y col., 2005). A. marginale y E. canis son modelos de patógenos altamente variables en los cuales se ha demostrado que la variabilidad genética influye en su epidemiología (Palmer y Brayton, 2013; Aguiar y col., 2013). Para el estudio de la variabilidad genética de A. marginale y E. canis se han usado fundamentalmente proteínas de membrana que son reconocidas por el sistema immune del hospedero vertebrado, despertando una respuesta immune, pero que también interaccionan con las células blanco para facilitar la unión e invasión bacteriana (de la Fuente y col., 2010). Las glicoproteínas MSP1a (Major surface

protein 1 alfa ¿ en sus siglas en inglés) y TRP36 (Tanden Repeat Protein 36 ¿ en sus siglas en inglés) han mostrado ser útiles para la caracterización genética de diferentes cepas variables de A. marginale y E. canis respectivamente (Cabezas-Cruz y col., 2013a; Zweygarth y col., 2014). A pesar de que existen evidencias de que MSP1a y TRP36 (también conocida como gp36) son altamente variables, se sabe poco acerca de la evolución de esta variación y si tiene alguna relación con la transmisión por vectores. Al estudiar este tema, algunas preguntas interesantes se ponen de relieve. ¿Que factores provocan o influyen en que la variabilidad genética de A. marginale y E. canis sea mayor en algunas zonas del mundo comparadas con otras?, ¿Tienen los vectores o las diferentes especies de vectores alguna influencia sobre esto? y ¿Conocer estos factores nos ayudará a implementar medidas de control y diagnóstico para estos agentes? Nuestra hipótesis de trabajo en el desarrollo de esta tesis fue que la variabilidad genética de las proteínas de membrana (como MSP1a y TRP36) reflejan la evolución de las interacciones entre patógeno y hospederos (vertebrado e invertebrado) de A. marginale y E. canis y además que este conocimiento se puede usar tanto para estudios epidemiológicos como para implementar medidas de control y medios diagnóstico.

Alejandro Cabezas-Cruz was supported by the EU Marie Curie actions FP7-PEOPLE-ITN program: POSTICK ITN (Post-graduate training network for capacity building to control ticks and tick-borne diseases; EU Grant No. 238511) and by a grant Ministère de l'Education Supérieure et de la Recherche of France. This work was also possible thanks to grants BFU2011-23896 and EU FP7 ANTIGONE project number 278976.

Trabajo presentado por el M.C. Alejandro Cabezas-Cruz para optar al grado de doctor por la Universidad de Castilla La Mancha-Departamento de Ciencia y Tecnología Agroforestal y Genética.

Peer Reviewed