Fusarium oxysporum (Fo) appartient à un groupe d'hyphomycètes du sol qui sont regroupés taxonomiquement dans le complexe d'espèces Fusarium oxysporum (FOSC). Jusqu'à présent, ceux qui infectaient les bananes étaient placés dans la forma specialis cubense (Foc). Récemment, cependant, ces lignées Foc génétiquement différentes ont été reconnues comme de nouvelles Fusarium spp. placées dans le Fusarium of Banana Complex (FOBC). Un membre de ce complexe F. odoratissimum II-5 qui comprend uniquement la soi-disant race tropicale 4 (TR4), est un problème majeur qui balaie les zones de production de banane Cavendish dans plusieurs régions du monde. Pour cette raison, il existe un besoin urgent d'une méthode de phénotypage qui permette le dépistage de la résistance à TR4 d'un grand nombre de génotypes de bananes. La plupart des espèces de Fusarium produisent trois types de spores : les macroconidies, les microconidies et les chlamydospores persistantes qui peuvent contaminer les sols pendant de nombreuses années. La production d'inoculum a été un goulot d'étranglement important pour un phénotypage efficace en raison du nombre faible ou variable de conidies et des procédures de laboratoire élaborées nécessitant une infrastructure spécifique. Ici, nous rapportons une méthode de production de spores rapide, simple et à haut rendement pour neuf spécialités de F. oxysporum formae ainsi que pour les espèces de biocontrôle Fo47 et Fo618-12. Pour le Fusarium spp. causant le flétrissement du Fusarium ou la maladie de Panama de la banane, nous avons utilisé le protocole pour quatre espèces comprenant les races physiologiques reconnues, y compris la race tropicale 4 (TR4). Nous avons ensuite testé l'inoculum produit dans des essais comparatifs d'inoculation sur des plants de banane pour évaluer leur efficacité. Tous les tests ont entraîné des symptômes typiques dans les 10 semaines ; des différences significatives dans les évaluations finales de la maladie ont été observées, en fonction de la concentration de l'inoculum. Le versement de l'inoculum directement sur les plants de banane a montré les résultats les plus cohérents et reproductibles, tels qu'exprimés dans le flétrissement externe, la décoloration interne et déterminés par des tests PCR en temps réel sur des rhizomes entiers. De plus, cette méthode permet l'inoculation de 250 plantes par heure par un individu facilitant ainsi le phénotypage de grandes populations mutantes et reproductrices.

Fusarium oxysporum (Fo) pertenece a un grupo de hifomicetos transmitidos por el suelo que se cotejan taxonómicamente en el Complejo de Especies de Fusarium oxysporum (FOSC). Hasta ahora, los plátanos infectantes se colocaban en la forma specialis cubense (Foc). Recientemente, sin embargo, estos linajes Foc genéticamente diferentes fueron reconocidos como nuevas especies de Fusarium colocadas en el Complejo Fusarium of Banana (FOBC). Un miembro de este complejo F. odoratissimum II-5 que comprende únicamente la llamada Raza Tropical 4 (TR4), es un problema importante que barre las zonas de producción de banano Cavendish en varias regiones del mundo. Debido a esto, existe una necesidad urgente de un método de fenotipificación que permita el cribado de la resistencia a TR4 de un gran número de genotipos de banano. La mayoría de las especies de Fusarium producen tres tipos de esporas: macroconidios, microconidios y las clamidiosporas persistentes que pueden contaminar los suelos durante muchos años. La producción de inóculos ha sido un importante cuello de botella para una fenotipificación eficiente debido al bajo o variable número de conidios y a los elaborados procedimientos de laboratorio que requieren una infraestructura específica. Aquí, informamos un método de producción de esporas rápido, simple y de alto rendimiento para nueve especies de F. oxysporum formae, así como para las especies de biocontrol Fo47 y Fo618-12. Para Fusarium spp. que causa el marchitamiento por Fusarium o la enfermedad de Panamá del plátano, utilizamos el protocolo para cuatro especies que comprenden las razas fisiológicas reconocidas, incluida la Raza Tropical 4 (TR4). Posteriormente, probamos el inóculo producido en ensayos comparativos de inoculación en plantas de banano para evaluar su eficiencia. Todos los ensayos dieron como resultado síntomas típicos en 10 semanas; se observaron diferencias significativas en las clasificaciones finales de la enfermedad, dependiendo de la concentración del inóculo. El vertido del inóculo directamente sobre las plantas de banano mostró los resultados más consistentes y reproducibles, expresados en marchitamiento externo, decoloración interna y determinados por ensayos de PCR en tiempo real en rizomas enteros. Además, este método permite la inoculación de 250 plantas por hora por un individuo, lo que facilita el fenotipado de grandes poblaciones mutantes y reproductoras.

Fusarium oxysporum (Fo) belongs to a group of soil-borne hyphomycetes that are taxonomically collated in the Fusarium oxysporum Species Complex (FOSC). Hitherto, those infecting bananas were placed in the forma specialis cubense (Foc). Recently, however, these genetically different Foc lineages were recognized as new Fusarium spp. placed in the Fusarium of Banana Complex (FOBC). A member of this complex F. odoratissimum II-5 that uniquely comprises the so-called Tropical Race 4 (TR4), is a major problem sweeping through production zones of Cavendish banana in several regions of the world. Because of this, there is an urgent need for a phenotyping method that allows the screening for resistance to TR4 of large numbers of banana genotypes. Most Fusarium species produce three types of spores: macroconidia, microconidia and the persistent chlamydospores that can contaminate soils for many years. Inoculum production has been an important bottleneck for efficient phenotyping due to the low or variable number of conidia and the elaborate laboratory procedures requiring specific infrastructure. Here, we report a rapid, simple and high-yielding spore production method for nine F. oxysporum formae speciales as well as the biocontrol species Fo47 and Fo618-12. For Fusarium spp. causing Fusarium wilt or Panama disease of banana, we used the protocol for four species comprising the recognized physiological races, including Tropical Race 4 (TR4). We subsequently tested the produced inoculum in comparative inoculation trials on banana plants to evaluate their efficiency. All assays resulted in typical symptoms within 10 weeks; significant differences in final disease ratings were observed, depending on inoculum concentration. Pouring inoculum directly onto banana plants showed the most consistent and reproducible results, as expressed in external wilting, internal discoloration and determined by real-time PCR assays on entire rhizomes. Moreover, this method allows the inoculation of 250 plants per hour by one individual thereby facilitating the phenotyping of large mutant and breeding populations.

ينتمي Fusarium oxysporum (FO) إلى مجموعة من الفطريات الخثارية التي تنقلها التربة والتي يتم تجميعها تصنيفياً في Fusarium oxysporum Species Complex (FOSC). حتى الآن، تم وضع تلك التي تصيب الموز في الشكل الخاص المكعب (FOC). ومع ذلك، في الآونة الأخيرة، تم التعرف على سلالات FOC المختلفة وراثيًا على أنها أنواع Fusarium جديدة موضوعة في Fusarium of Banana Complex (FOBC). إن عضوًا في هذا المركب F. odoratissimum II -5 الذي يضم بشكل فريد ما يسمى بالسباق الاستوائي 4 (TR4)، يمثل مشكلة كبيرة تجتاح مناطق إنتاج موز كافنديش في عدة مناطق من العالم. لهذا السبب، هناك حاجة ملحة لطريقة التنميط الظاهري التي تسمح بفحص مقاومة TR4 لأعداد كبيرة من الأنماط الجينية للموز. تنتج معظم أنواع الفيوزاريوم ثلاثة أنواع من الجراثيم: الماكروكونيديا والميكروكونيديا والبكتيريا المتدثرة المستمرة التي يمكن أن تلوث التربة لسنوات عديدة. كان إنتاج اللقاح عنق زجاجة مهمًا للتنميط الظاهري الفعال بسبب العدد المنخفض أو المتغير من المخاريط والإجراءات المختبرية المتقنة التي تتطلب بنية تحتية محددة. هنا، نبلغ عن طريقة إنتاج أبواغ سريعة وبسيطة وعالية الغلة لتسعة أنواع متخصصة من الأبواغ الحمضية بالإضافة إلى أنواع المكافحة الحيوية Fo47 و Fo618 -12. بالنسبة لأنواع الفيوزاريوم التي تسبب ذبول الفيوزاريوم أو مرض الموز في بنما، استخدمنا البروتوكول لأربعة أنواع تضم الأجناس الفسيولوجية المعترف بها، بما في ذلك العرق الاستوائي 4 (TR4). قمنا بعد ذلك باختبار اللقاح المنتج في تجارب التلقيح المقارنة على نباتات الموز لتقييم كفاءتها. أسفرت جميع الفحوصات عن أعراض نموذجية في غضون 10 أسابيع ؛ لوحظت اختلافات كبيرة في تقييمات المرض النهائية، اعتمادًا على تركيز اللقاح. أظهر صب اللقاح مباشرة على نباتات الموز النتائج الأكثر اتساقًا وقابلية للتكرار، كما هو معبر عنه في الذبول الخارجي، وتغير اللون الداخلي وتحديده من خلال فحوصات تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي على جذور كاملة. علاوة على ذلك، تسمح هذه الطريقة بتلقيح 250 نباتًا في الساعة من قبل فرد واحد مما يسهل التنميط الظاهري لمجموعات كبيرة من الطافرات والتكاثر.