Daun tempuyung merupakan salah satu tumbuhan obat tradisional Indonesia yang banyak dimanfaatkan untuk pengobatan batu ginjal, anti inflamasi, disentri, radang dan rematik. Tempuyung banyak mengandung senyawa flavonoid yang merupakan golongan fenol terbesar. Penelitian ini dimulai dengan pengumpulan dan persiapan sampel, skrining fitokimia, pembuatan ekstrak etanol, dan pengujian kandungan total fenol dengan metode kolorimetri pereaksi Folin-Ciocalteu menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan asam galat sebagai baku pembanding. Hasil skrining fitokimia menunjukkan daun tempuyung mengandung senyawa flavonoid. Penetapan kadar total fenol menggunakan metode spektrofotometri pereaksi Folin- Ciocalteu didapat nilai regresi y = 0,00077 x + 0,03667 dengan nilai r2 = 0,99757 sehingga didapat nilai rata – rata kadar total fenol 45,04 ± 0,46 mg GAE/g ekstrak. Tempuyung is one of traditional medical plant in Indonesia and used in kidney stone medication, anti-inflammatory, dysentery, inflammation, and rheumatism. Tempuyung contains substantial flavonoid which considers as the biggest phenol. This research started from the preparation and sample collection, phytochemical screening, ethanol extract preparation, and total phenol test using colorimetry method usingFolin-Ciocalteu reagent byUV-Vis spectrophotometer and gallic acid as the standard compound. The phytochemical screening indicated that tempuyung leaves contained flavonoid compound. The total phenol contentwas determined using colorimetry method of Folin-Ciocalteu reagent and resulted with regression value of y=0.00077 x+0.03667 and the value of r2=0.99757 and the average of total phenolcontent of 45.04 ± 0.46 mg GAE/g.