Colletotrichum gloeosporioides es un hongo fitopatógeno causante de la antracnosis de frutos en climas tropicales y subtropicales, mucho se ha estudiado sobre la patogénesis de este hongo con el fin de disminuir la infección hacia los cultivos, son pocos los reportes que actualmente existen sobre su producción de enzimas quitina desacetilasa (CDA). Estas enzimas son requeridas para su actividad patogénica y para el desarrollo del mismo. En virtud de lo anterior, en esta tesis de doctorado se estudiaron diversos factores que afectan la producción de dichas proteínas, como lo son, la fuente de carbono y nitrógeno, inductores, el pH y el sistema de producción enzimática empleado. También se determinó la actividad de las quitinas desacetilasas después de ser purificadas sobre diferentes sustratos , tales como quitosano reacetilados con un DA del 57 y 69 %, una quitina modificada químicamente , N - acetil glucosamina y ácido hialurónico. El tipo de la fuente de nitrógeno y de carbono influyeron significativamente sobre la producción de CDA , mostrando mayores actividades cuando se utilizó glucosa y ácido glutámico, de la misma manera el uso del ácido abscísico como inductor de la actividad favoreció la producción de estas enzimas obteniendo 9.5 veces (1.05 U mg proteína - 1) más con respecto al control (0.11 U mg proteína - 1) , posteriormente se observó que el pH del medio de cultivo afectó de manera significativa la producción de la enzima mostrando mayores actividades a pH ácido que a pH neutro.

Por otra parte, la purificación de la enzima se llevó a cabo precipitando con sulfato de amonio a un 80 % de saturación, cromatografía de exclusión molecular y por intercambio aniónico , obteniendo una actividad específica de 2.9 U mg de proteína - 1 (8.5 veces más que lo obtenido en el extracto crudo). La enzima purificada presentó un peso molecular aparente de 50 kDa , detectándose actividad sobre etilenglicol quitina en el zimograma realizado. La temperatura óptima fue de 37 °C y el pH óptimo fue de 3, cuando la etilenglicol quitina y un quitosano reacetilado con DA=69 % fueron utilizados como sustratos, presentando una concentración óptima para cada sustrato de 12.5 y 15 mg mL - 1 respectivamente. La CDA presentó actividad significativa sobre quitosanos reacetilados y sobre una quitina tratada previamente con la técnica despresurizac ión rápida con freón en estado supercrítico y fibrilación, los productos obtenidos de la reacción fueron analizados por resonancia magnética nuclear (H RMN ) y por cromatografía de exclusión molecular . Los resultados indican que la actividad de la enzima tuvo un efecto importan te sobre el grado de acetilación (DA) e n los productos de reacción , disminuyendo en un 36.5 % el grado de acetilación del quitosano reacetilado al 69 % y un 17 % sobre la quitina, mientras que los pesos moleculares de las muestras disminuyeron de manera no significativa.

Es importante resaltar que estas altas producciones de enzima se vieron acompañadas de una reducción de la fase lag durante el desarrollo del hongo, observándose que el proceso de germinación y la elongación de las hifas de C. gloeos porioides se presentó a menores tiempos en comparación del control (12 h) . La modif icación al sistema de producción enzimática , pasando de un sistema cerrado a un sistema por lote alimentado incrementó la producción de la CDA. El aumento en la producción de estás enzimas modificó la composición de las pared es celulares de l os hongo s como fue evidente después de extraer quitina y analizar las fracciones acetiladas (FA). Las quitinas desacetilasas producidas por C. gloeosporioides fueron capaces de desacetilar la quitina cuando se añadió ácido abscísico al medio de cultivo (FA =0.79) mientras que el control mantuvo una alta FA de 0.90 .