Antecedentes: El trabajo por turnos es una característica muy común en la asistencia sanitaria y se ha asociado con el estrés relacionado con el trabajo. Objetivo: En este estudio, se investigó la relación entre el trabajo por turnos actual y los síntomas de estrés relacionados con el trabajo entre los trabajadores de la salud de un entorno clínico en Medellín, Colombia. Métodos: Se llevó a cabo un estudio transversal entre enero y julio de 2014. Un total de 50,5% de los participantes llevaban a cabo sus actividades de trabajo en turnos rotativos y 49,5% trabajaban sólo durante el día. La mayoría de los profesionales que completaron la encuesta eran enfermeras y personal administrativo. Los participantes completaron información demográfica ocupacional y acerca de su estilo de vida, y un instrumento de auto-reporte sobre síntomas de estrés relacionado con el trabajo. Resultados: La muestra del estudio consistió de 160 (80%) mujeres y 40 (20%) hombres. La edad media era de 35,1 ± 9,1. En general, no se observaron diferencias significativas en los síntomas emocionales, fisiológicos, de comportamiento social, intelectual y ocupacionales en los trabajadores por turnos en comparación con los trabajadores diurnos. En un análisis estratificado, en el grupo de enfermeras y auxiliares de enfermería, quienes realizaban trabajo por turnos se observaron significativamente menores síntomas fisiológicos y emocionales y mayores síntomas psicoemocionales que los trabajadores de día (p = 0,030 y p = 0,047, respectivamente).