Pseudomonas aeruginosa es una bacteria oportunista en infecciones nosocomiales, que tiene la capacidad de reducir la actividad de los antibióticos de amplio espectro debido a la formación de biopelícula, llevando a que sea categorizada como una bacteria de prioridad crítica a nivel mundial. La biopelícula está formada por comunidades de bacterias dentro de una matriz extracelular compuesta de proteínas, polisacáridos y ADN extracelular que le confieren protección, por ello se ha considerado como un blanco potencial para el control de P. aeruginosa. En este sentido, el objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de Cloperidona, Gentamicina y Azitromicina, así como de las mezclas binarias de Cloperidona/Gentamicina y Cloperidona/Azitromicina sobre la susceptibilidad y la formación de la biopelícula de P. aeruginosa (PAO1) ATCC BAA-47. Para lo cual, se determinó las concentraciones mínimas inhibitorias (CMI) por la técnica de microdilución para los compuestos y las dos mezclas, así como su efecto en la formación de biopelícula de P. aeruginosa por la técnica de tinción con cristal violeta. A partir de los resultados se determinó que las CMI para inhibir el crecimiento de P aeruginosa de los antibióticos gentamicina y azitromicina fueron de 1 y 31.25 µg/mL, respectivamente, mientras que Cloperidona no mostró efectos inhibitorios sobre el crecimiento a la máxima concentración evaluada de 100 µg/mL. Adicionalmente, para los compuestos, el mayor efecto en la formación de biopelícula a la menor concentración fue para Cloperidona a 0.39 µg/mL, gentamicina a 0.5 µg/mL y azitromicina a 1.95 µg/mL, con porcentajes de inhibición de 56%, 50% y 88%, respectivamente. Para las dos mezclas Cloperidona/Azitromicina y Cloperidona/Gentamicina (concentraciones sub-MIC) ninguna presentó mayores efectos inhibitorios si se compara con el efecto de la gentamicina cuando fue evaluada de manera independiente. Sin embargo, las mezclas Cloperidona/Gentamicina (0.39 µg/mL/ 0.03 µg/mL) y Cloperidona/Azitromicina (0.39 µg/mL/ 0.97 µg/mL) fueron las que mostraron el mayor efecto inhibitorio sobre la biopelícula con porcentajes de 77% y 88%, además de presentar efectos sinérgicos ya que fue posible bajar la concentración de los antibióticos en ambos casos para tener efectos inhibitorios en la formación de biopelícula. Estos resultados permiten concluir que las mezclas de los antibióticos con Cloperidona pueden ser utilizados para la reducción en la formación de la biopelícula, uno de los principales mecanismos que utiliza la bacteria para reducir la acciones de los antibióticos y así ser considerado como estrategia para frenar la resistencia microbiana.