Klebsiella pneumoniae productora de betalactamasa de espectro extenso (βLEE) es la bacteria más frecuentemente implicada en infecciones nosocomiales en las unidades de alto riesgo neonatal y cuidados intensivos de adultos del Instituto Autónomo Hospital Universitario de Los Andes. El objetivo de la investigación fue. determinar las características microbiológicas y moleculares asociadas a las infecciones causadas por esta bacteria. Las cepas de K. pneumoniae se identificaron mediante procedimientos convencionales. La susceptibilidad a los agentes antimicrobianos se realizó a través de la prueba de difusión del disco en agar de acuerdo a las instrucciones del CLSI 2010. La CIM se determinó a través del método Etest. La detección de genes blaTEM, blaSHV y blaCTX-M en las cepas de K. pneumoniae se realizó mediante PCR y la Genotípificación a través de la Reacción en cadena de la polimerasa de elementos palindrómicos extragénicos repetitivos. Se caracterizaron 17 cepas de K. pneumoniae aisladas de neonatos con infección nosocomial, así como 11 aisladas de pacientes hospitalizados en la UCIa entre Junio-Noviembre 2009. Los resultados de esta investigación revelan un alto porcentaje de resistencia a los betalactámicos y la presencia de βLEE tipo TEM, SHV y CTX-M en las cepas aisladas en las dos unidades. Mediante el análisis genotípico REP-PCR se detectaron varias clonas lo cual sugiere que existen cepas resistentes específicas no endémicas más que la circulación y transmisión de un aislado habitual entre pacientes.