La presente publicación tiene dos objetivos principales: 1. dar a conocer varias especies de mamíferos que son nuevos registros para Guanajuato y 2. mencionar localidades adicionales para algunas especies de mamíferos que han sido colectadas previamente en el estado, incrementando su distribución en la entidad. Los ejemplares se colectaron durante los años 2003 a 2006 en varias localidades de la Reserva de la Biosfera “Sierra Gorda de Guanajuato” y se depositaron en la Colección de Mastozoología de la Escuela Nacional de Ciencias Biológicas del Instituto Politécnico Nacional. Además de los colectados, se incluyeron otros animales que ya se encontraban en dicha colección. Se presentan 11 nuevos registros y 14 especies que aumentan su distribución conocida en Guanajuato, representados por 364 especímenes de 5 familias, 14 géneros y 25 especies (20 roedores y 5 murciélagos). De estas especies destacan tres roedores endémicos de México (Peromyscus difficilis, P. levipes y P. melanophrys). De los murciélagos, Desmodus rotundus no había sido registrada previamente para el estado y Leptonycteris yerbabuenae fue la única especie que presentó algún estatus de protección. Las 25 especies de este escrito complementan y actualizan el conocimiento de la biodiversidad de la mastofauna, adicionándose a las 73 publicadas previamente dando un total de 98 especies registradas hasta el momento para Guanajuato.