Cette étude a évalué la survenue et la signification clinique potentielle de l'hétérogénéité mutationnelle intratumorale de l'EGFR chez des patients chinois atteints d'un cancer du poumon non à petites cellules (CPNPC). Quatre-vingt-cinq patients atteints d'un CPNPC de stade IIIa-IV ayant subi une résection chirurgicale palliative ont été inclus dans cette étude. Parmi ceux-ci, 45 patients étaient porteurs de mutations de l'EGFR (groupe M) et 40 patients étaient de type sauvage (groupe W). Chaque échantillon de tumeur a été microdisséqué pour donner 28 à 34 foyers tumoraux et la mutation EGFR intratumorale a été déterminée à l'aide de la chromatographie liquide haute performance dénaturante (DHPLC) et du système de mutation réfractaire à l'amplification (ARM). Les nombres de copies de l'EGFR ont été mesurés à l'aide de l'hybridation in situ par fluorescence (FISH). La microdissection a donné 1 431 foyers tumoraux de patients mutants de l'EGFR (groupe M) et 1 238 foyers de patients de type sauvage (groupe W). Les fréquences des mutants de l'EGFR dans le groupe M étaient de 80,6 % (1 154/1 431) et 87,1 % (1 247/1 431) en utilisant la DHPLC et LES BRAS, respectivement. Une combinaison de cellules mutées EGFR et de cellules de type sauvage a été détectée dans 32,9% (28/85) des échantillons par DHPLC et 28,2% (24/85) par ARM, soutenant l'apparition d'une hétérogénéité intratumorale. Trente et un patients (36,5 %) ont été identifiés comme EGFR FISH-positif. Les patients hébergeant une hétérogénéité mutationnelle intratumorale possédaient un nombre de copies de l'EGFR inférieur à celui des tumeurs contenant des cellules mutantes seules (16,7 % contre 71,0 %, P<0,05). Parmi les 26 patients ayant reçu des ITK-EGFR, la teneur moyenne en mutations de l'EGFR était plus élevée chez les patients présentant une réponse partielle (86,1 %) ou une maladie stable (48,7 %) par rapport aux patients présentant une maladie progressive (6,0 %) (P = 0,001). Il a également été montré une relation entre la survie sans progression (SSP) et le contenu différent des groupes de mutation de l'EGFR (EGFR de type sauvage pur, mutation de l'EGFR avec hétérogénéité et EGFR muté pur) (P = 0,001). Environ 30 % des patients présentaient une hétérogénéité mutationnelle de l'EGFR intratumorale, accompagnée d'un nombre de copies de l'EGFR relativement faible. Le contenu mutant de l'EGFR a été corrélé avec la réponse et le pronostic des ITK de l'EGFR.

Este estudio evaluó la aparición y la posible importancia clínica de la heterogeneidad mutacional del EGFR intratumoral en pacientes chinos con cáncer de pulmón de células no pequeñas (CPNM). En este estudio se incluyeron 85 pacientes con CPNM en estadio IIIa-IV que se habían sometido a resección quirúrgica paliativa. De estos, 45 pacientes portaban mutaciones de EGFR (grupo M) y 40 pacientes eran de tipo salvaje (grupo W). Cada muestra tumoral se microdiseccionó para producir 28-34 focos tumorales y se determinó la mutación intratumoral de EGFR usando cromatografía líquida de alto rendimiento desnaturalizante (DHPLC) y sistema de mutación refractaria de amplificación (ARMS). El número de copias de EGFR se midió utilizando hibridación fluorescente in situ (FISH). La microdisección produjo 1.431 focos tumorales de pacientes con EGFR mutante (grupo M) y 1.238 focos de pacientes de tipo salvaje (grupo W). Las frecuencias mutantes de EGFR en el grupo M fueron 80.6% (1,154/1 ,431) y 87.1% (1,247/1 ,431) usando DHPLC y ARMS, respectivamente. Se detectó una combinación de células mutadas con EGFR y de tipo salvaje en el 32,9% (28/85) de las muestras por DHPLC y el 28,2% (24/85) por ARMS, lo que respalda la aparición de heterogeneidad intratumoral. Treinta y un pacientes (36,5%) se identificaron como EGFR Fish positivo. Los pacientes que albergaban heterogeneidad mutacional intratumoral poseían números de copias de EGFR más bajos que aquellos tumores que contenían células mutantes solas (16,7% frente a 71,0%, P<0,05). Entre los 26 pacientes que habían recibido EGFR-TKI, el contenido medio de mutación de EGFR fue mayor en los pacientes que mostraron respuesta parcial (86,1%) o enfermedad estable (48,7%) en comparación con los pacientes que experimentaron enfermedad progresiva (6,0%) (P = 0,001). También mostró relación entre la supervivencia libre de progresión (SLP) y el diferente contenido de los grupos de mutación de EGFR (EGFR de tipo salvaje puro, mutación de EGFR con heterogeneidad y EGFR mutado puro) (P = 0,001). Aproximadamente el 30% de los pacientes presentaron heterogeneidad mutacional de EGFR intratumoral, acompañada de un número de copias de EGFR relativamente bajo. El contenido mutante de EGFR se correlacionó con la respuesta y el pronóstico de los EGFR-TKI.

This study evaluated occurrence and potential clinical significance of intratumoral EGFR mutational heterogeneity in Chinese patients with non-small cell lung cancer (NSCLC).Eighty-five stage IIIa-IV NSCLC patients who had undergone palliative surgical resection were included in this study. Of these, 45 patients carried EGFR mutations (group-M) and 40 patients were wild-type (group-W). Each tumor sample was microdissected to yield 28-34 tumor foci and Intratumoral EGFR mutation were determined using Denaturing High Performance Liquid Chromatography (DHPLC) and Amplification Refractory Mutation System (ARMS). EGFR copy numbers were measured using fluorescence in situ hybridization (FISH).Microdissection yielded 1,431 tumor foci from EGFR mutant patients (group-M) and 1,238 foci from wild-type patients (group-W). The EGFR mutant frequencies in group-M were 80.6% (1,154/1,431) and 87.1% (1,247/1,431) using DHPLC and ARMS, respectively. A combination of EGFR-mutated and wild-type cells was detected in 32.9% (28/85) of samples by DHPLC and 28.2% (24/85) by ARMS, supporting the occurrence of intratumoral heterogeneity. Thirty-one patients (36.5%) were identified as EGFR FISH-positive. Patients harboring intratumoral mutational heterogeneity possessed lower EGFR copy numbers than those tumors contained mutant cells alone (16.7% vs. 71.0%, P<0.05). Among 26 patients who had received EGFR-TKIs, the mean EGFR mutation content was higher in patients showing partial response (86.1%) or stable disease (48.7%) compared with patients experiencing progressive disease (6.0%) (P = 0.001). There also showed relationship between progression-free survival (PFS) and different content of EGFR mutation groups (pure wild type EGFR, EGFR mutation with heterogeneity and pure mutated EGFR) (P = 0.001).Approximately 30% of patients presented intratumoral EGFR mutational heterogeneity, accompanying with relatively low EGFR copy number. EGFR mutant content was correlated with the response and prognosis of EGFR-TKIs.

قيمت هذه الدراسة الحدوث والأهمية السريرية المحتملة لعدم تجانس EGFR الطفري داخل الورم لدى المرضى الصينيين المصابين بسرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة (NSCLC). تم تضمين خمسة وثمانين مريضًا من المرحلة IIIA - IV من سرطان الرئة ذو الخلايا غير الصغيرة الذين خضعوا لعملية استئصال جراحية ملطفة في هذه الدراسة. من بين هؤلاء، حمل 45 مريضًا طفرات EGFR (المجموعة- M) و 40 مريضًا من النوع البري (المجموعة- W). تم تشريح كل عينة ورم لإنتاج بؤر الورم 28-34 وتم تحديد طفرة EGFR داخل الورم باستخدام استشراب السائل عالي الأداء (DHPLC) ونظام الطفرة الحرارية للتضخيم (ARMS). تم قياس أرقام نسخ EGFR باستخدام التهجين الفلوري في الموقع (FISH). أسفر التشريح الدقيق عن 1431 بؤرة ورم من مرضى طفرات EGFR (المجموعة- M) و 1238 بؤرة من مرضى من النوع البري (المجموعة- W). كانت الترددات المتحولة EGFR في المجموعة M 80.6 ٪ (1,154/1,431) و 87.1 ٪ (1,247/1,431) باستخدام DHPLC و ARMS، على التوالي. تم الكشف عن مزيج من الخلايا المتحورة EGFR والخلايا البرية في 32.9 ٪ (28/85) من العينات بواسطة DHPLC و 28.2 ٪ (24/85) بواسطة الأسلحة، مما يدعم حدوث عدم تجانس داخل الورم. تم تحديد واحد وثلاثين مريضًا (36.5 ٪) على أنهم إيجابيون لـ EGFR FISH. يمتلك المرضى الذين يعانون من عدم تجانس طفري داخل الورم أرقام نسخ أقل من EGFR من تلك الأورام التي تحتوي على خلايا متحولة وحدها (16.7 ٪ مقابل 71.0 ٪، P<0.05). من بين 26 مريضًا تلقوا EGFR - TKIs، كان متوسط محتوى طفرة EGFR أعلى لدى المرضى الذين أظهروا استجابة جزئية (86.1 ٪) أو مرضًا مستقرًا (48.7 ٪) مقارنة بالمرضى الذين يعانون من مرض تدريجي (6.0 ٪) (P = 0.001). أظهرت هناك أيضًا علاقة بين البقاء على قيد الحياة بدون تقدم (PFS) والمحتوى المختلف لمجموعات طفرات EGFR (طفرة EGFR من النوع البري النقي، طفرة EGFR مع عدم التجانس و EGFR المتحور النقي) (P = 0.001). أظهر ما يقرب من 30 ٪ من المرضى عدم تجانس طفري EGFR داخل الورم، مصحوبًا برقم نسخة EGFR منخفض نسبيًا. ارتبط محتوى طفرة EGFR باستجابة وتشخيص EGFR - TKIs.