Afin de détecter simultanément les anticorps sériques contre les hantavirus cliniquement importants de l'Ancien et du Nouveau Monde, des tests d'immunofluorescence indirecte (IFA) multiparamétriques basés sur des mosaïques de biopuces ont été développés. Chacun des substrats de mosaïque était constitué de cellules infectées par l'un des types de virus Hantaan (HTNV), Puumala (PUUV), Séoul (SEOV), Saaremaa (SAAV), Dobrava (DOBV), Sin Nombre (SNV) ou Andes (ANDV). Pour l'évaluation du dosage, les anticorps IgG et IgM sériques ont été analysés à l'aide de 184 sérums positifs pour l'hantavirus confirmés en laboratoire prélevés dans six centres de diagnostic chez des patients infectés activement ou précédemment par les sérotypes d'hantavirus suivants : PUUV (Finlande, n = 97) ; SEOV (Chine, n = 5) ; DOBV (Roumanie, n = 7) ; SNV (Canada, n = 23) ; ANDV (Argentine et Chili, n = 52). Le panel de contrôle comprenait 89 sérums provenant de donneurs de sang sains. Selon les tests de référence, les 184 échantillons de patients étaient séropositifs pour les IgG spécifiques à l'hantavirus (n = 177 ; 96 %) et/ou les IgM (n = 131 ; 72 %), tandis que tous les échantillons de contrôle étaient négatifs. Dans l'IFA multiparamétrique appliqué dans cette étude, 183 (99%) des sérums patients étaient IgG et 131 (71%) IgM positifs (selon les tests de référence : IgG, 96% ; IgM, 93%). La sensibilité globale à l'IFA pour l'analyse combinée des IgG et des IgM s'élevait à 100 % pour tous les sérotypes, à l'exception du VNS (96 %). Sur les 89 sérums témoins, 2 (2%) ont montré une réactivité IgG contre le substrat HTNV, mais pas contre tout autre hantavirus. En raison de la forte réactivité croisée des protéines de la nucléocapside hantavirale, des titrages des paramètres ont été effectués, permettant la détermination du sérotype chez >90 % des patients infectés par le PUUV et l'ANDV. Ainsi, l'IFA multiparamétrique permet un diagnostic sérologique très sensible et spécifique des infections à hantavirus et peut être utilisé pour différencier l'infection par le PUUV et l'ANDV des infections par les hantavirus transmis par Murinae (par exemple, DOBV et SEOV).

Con el fin de detectar anticuerpos séricos contra hantavirus clínicamente importantes del Viejo y Nuevo Mundo simultáneamente, se desarrollaron ensayos de inmunofluorescencia indirecta (IFA) multiparamétricos basados en mosaicos de biochips. Cada uno de los sustratos del mosaico consistía en células infectadas con uno de los tipos de virus Hantaan (HTNV), Puumala (PUUV), Seúl (SEOV), Saaremaa (SAAV), Dobrava (DOBV), Sin Nombre (SNV) o Andes (ANDV). Para la evaluación del ensayo, se analizaron los anticuerpos IgG e IgM en suero utilizando 184 sueros positivos para hantavirus confirmados por laboratorio recolectados en seis centros de diagnóstico de pacientes infectados activa o previamente con los siguientes serotipos de hantavirus: PUUV (Finlandia, n = 97); SEOV (China, n = 5); DOBV (Rumania, n = 7); SNV (Canadá, n = 23); ANDV (Argentina y Chile, n = 52). El panel de control estaba compuesto por 89 sueros de donantes de sangre sanos. De acuerdo con las pruebas de referencia, las 184 muestras de pacientes fueron seropositivas para IgG específica de hantavirus (n = 177; 96%) y/o IgM (n = 131; 72%), mientras que todas las muestras de control fueron negativas. En el IFA multiparamétrico aplicado en este estudio, 183 (99%) de los sueros de los pacientes eran IgG y 131 (71%) IgM positivos (de acuerdo con las pruebas de referencia: IgG, 96%; IgM, 93%). La sensibilidad general a IFA para el análisis combinado de IgG e IgM ascendió al 100% para todos los serotipos, excepto para SNV (96%). De los 89 sueros de control, 2 (2%) mostraron reactividad de IgG contra el sustrato HTNV, pero no contra ningún otro hantavirus. Debido a la alta reactividad cruzada de las proteínas de la nucleocápside hantaviral, se realizaron titulaciones de criterio de valoración, lo que permitió la determinación del serotipo en >90% de los pacientes infectados con PUUV y ANDV. Por lo tanto, la IFA multiparamétrica permite un diagnóstico serológico altamente sensible y específico de las infecciones por hantavirus y se puede utilizar para diferenciar la infección por PUUV y ANDV de las infecciones por hantavirus transmitidos por Murinae (por ejemplo, DOBV y SEOV).

In order to detect serum antibodies against clinically important Old and New World hantaviruses simultaneously, multiparametric indirect immunofluorescence assays (IFAs) based on biochip mosaics were developed. Each of the mosaic substrates consisted of cells infected with one of the virus types Hantaan (HTNV), Puumala (PUUV), Seoul (SEOV), Saaremaa (SAAV), Dobrava (DOBV), Sin Nombre (SNV) or Andes (ANDV). For assay evaluation, serum IgG and IgM antibodies were analyzed using 184 laboratory-confirmed hantavirus-positive sera collected at six diagnostic centers from patients actively or previously infected with the following hantavirus serotypes: PUUV (Finland, n = 97); SEOV (China, n = 5); DOBV (Romania, n = 7); SNV (Canada, n = 23); ANDV (Argentina and Chile, n = 52). The control panel comprised 89 sera from healthy blood donors. According to the reference tests, all 184 patient samples were seropositive for hantavirus-specific IgG (n = 177; 96%) and/or IgM (n = 131; 72%), while all control samples were tested negative. In the multiparametric IFA applied in this study, 183 (99%) of the patient sera were IgG and 131 (71%) IgM positive (accordance with the reference tests: IgG, 96%; IgM, 93%). Overall IFA sensitivity for combined IgG and IgM analysis amounted to 100% for all serotypes, except for SNV (96%). Of the 89 control sera, 2 (2%) showed IgG reactivity against the HTNV substrate, but not against any other hantavirus. Due to the high cross-reactivity of hantaviral nucleocapsid proteins, endpoint titrations were conducted, allowing serotype determination in >90% of PUUV- and ANDV-infected patients. Thus, multiparametric IFA enables highly sensitive and specific serological diagnosis of hantavirus infections and can be used to differentiate PUUV and ANDV infection from infections with Murinae-borne hantaviruses (e.g. DOBV and SEOV).

من أجل الكشف عن الأجسام المضادة في المصل ضد فيروسات هانتا العالم القديم والجديد المهمة سريريًا في وقت واحد، تم تطوير فحوصات التألق المناعي غير المباشر متعددة المعايير (IFAs) بناءً على فسيفساء الرقاقة الحيوية. تتكون كل ركيزة من ركائز الفسيفساء من خلايا مصابة بأحد أنواع الفيروسات Hantaan (HTNV) أو Puumala (PUUV) أو Seoul (SEOV) أو Saaremaa (SAAV) أو Dobrava (DOBV) أو Sin Nombre (SNV) أو Andes (ANDV). لتقييم الفحص، تم تحليل الأجسام المضادة لـ IgG و IgM في المصل باستخدام 184 مصل إيجابي لفيروس هانتا مؤكد مختبريًا تم جمعه في ستة مراكز تشخيصية من المرضى المصابين بشكل نشط أو سابقًا بأنماط مصل فيروس هانتا التالية: PUUV (فنلندا، n = 97 )؛ SEOV (الصين، n = 5 )؛ DOBV (رومانيا، n = 7 )؛ SNV (كندا، n = 23 )؛ ANDV (الأرجنتين وتشيلي، n = 52). تضمنت لوحة التحكم 89 مصلًا من متبرعين أصحاء بالدم. وفقًا للاختبارات المرجعية، كانت جميع عينات المرضى البالغ عددها 184 عينة إيجابية المصل لـ IgG الخاص بفيروس هانتا (n = 177 ؛ 96 ٪) و/أو IgM (n = 131 ؛ 72 ٪)، في حين تم اختبار جميع عينات التحكم سلبية. في IFA متعدد المتغيرات المطبق في هذه الدراسة، كان 183 (99 ٪) من مصل المريض IgG و 131 (71 ٪) IgM إيجابي (وفقًا للاختبارات المرجعية: IgG، 96 ٪ ؛ IgM، 93 ٪). بلغت حساسية IFA الإجمالية لتحليل IgG و IgM مجتمعين 100 ٪ لجميع الأنماط المصلية، باستثناء SNV (96 ٪). من أصل 89 مصل تحكم، أظهر 2 (2 ٪) تفاعل IgG ضد ركيزة HTNV، ولكن ليس ضد أي فيروس هانتا آخر. نظرًا للتفاعل التبادلي العالي لبروتينات القفيصة النووية الهانتافيرالية، تم إجراء معايرات نقطة النهاية، مما سمح بتحديد النمط المصلي في أكثر من 90 ٪ من المرضى المصابين بـ PUUV و ANDV. وبالتالي، يتيح IFA متعدد المعايير التشخيص المصلي عالي الحساسية والمحدد لعدوى فيروس هانتا ويمكن استخدامه للتمييز بين عدوى PUUV و ANDV من العدوى بفيروسات هانتا التي تنقلها مورينا (مثل DOBV و SEOV).