Les filamines sont d'importantes protéines de réticulation de l'actine impliquées dans l'échafaudage, la stabilisation de la membrane et la transduction du signal, par interaction avec les canaux ioniques, les récepteurs et les protéines de signalisation. Nous rapportons ici l'interaction physique et fonctionnelle entre les filamines et la polycystine-2, un canal cationique de type TRP muté chez 10 à 15 % des patients atteints de polykystose rénale autosomique dominante. Les expériences d'extraction des deux hybrides de levure et de la GST ont démontré que les C-terminaux des isoformes de la filamine A, B et C se lient directement aux deux N-terminaux intracellulaires et C-terminaux de la polycystine-2. Des expériences de co-immunoprécipitation réciproque ont montré que la polycystine-2 endogène et les filamines sont dans les mêmes complexes dans les cellules épithéliales rénales et les cellules A7 du mélanome humain. Nous avons ensuite examiné l'effet de la filamine sur la fonction des canaux de la polycystine-2 par des études électrophysiologiques avec un système de reconstitution bicouche lipidique et avons constaté que la filamine-A inhibe considérablement l'activité des canaux de la polycystine-2. Notre étude indique que les filamines sont des régulateurs importants de la fonction des canaux de la polycystine-2 et relie davantage la dynamique cytosquelettique de l'actine à la régulation de cette protéine des canaux.

Las filaminas son importantes proteínas de reticulación de actina implicadas en el andamiaje, la estabilización de la membrana y la transducción de señales, a través de la interacción con canales iónicos, receptores y proteínas de señalización. Aquí informamos la interacción física y funcional entre las filaminas y la policistina-2, un canal catiónico de tipo TRP mutado en el 10-15% de los pacientes con enfermedad renal poliquística autosómica dominante. Los experimentos de doble híbrido de levadura y extracción de GST demostraron que los extremos C de las isoformas de filamina A, B y C se unen directamente a los extremos N y C intracelulares de la policistina-2. Los experimentos de coinmunoprecipitación recíproca mostraron que la policistina-2 endógena y las filaminas están en los mismos complejos en las células epiteliales renales y las células A7 de melanoma humano. Luego examinamos el efecto de la filamina en la función del canal de policistina-2 mediante estudios de electrofisiología con un sistema de reconstitución de bicapa lipídica y encontramos que la filamina-A inhibe sustancialmente la actividad del canal de policistina-2. Nuestro estudio indica que las filaminas son reguladores importantes de la función del canal de policistina-2, y además vincula la dinámica del citoesqueleto de actina con la regulación de esta proteína del canal.

Filamins are important actin cross-linking proteins implicated in scaffolding, membrane stabilization and signal transduction, through interaction with ion channels, receptors and signaling proteins. Here we report the physical and functional interaction between filamins and polycystin-2, a TRP-type cation channel mutated in 10-15% patients with autosomal dominant polycystic kidney disease. Yeast two-hybrid and GST pull-down experiments demonstrated that the C-termini of filamin isoforms A, B and C directly bind to both the intracellular N- and C-termini of polycystin-2. Reciprocal co-immunoprecipitation experiments showed that endogenous polycystin-2 and filamins are in the same complexes in renal epithelial cells and human melanoma A7 cells. We then examined the effect of filamin on polycystin-2 channel function by electrophysiology studies with a lipid bilayer reconstitution system and found that filamin-A substantially inhibits polycystin-2 channel activity. Our study indicates that filamins are important regulators of polycystin-2 channel function, and further links actin cytoskeletal dynamics to the regulation of this channel protein.

الفيتامينات هي بروتينات الأكتين المهمة المتشابكة المتورطة في السقالات وتثبيت الغشاء ونقل الإشارة، من خلال التفاعل مع القنوات الأيونية والمستقبلات وبروتينات الإشارة. هنا نبلغ عن التفاعل الجسدي والوظيفي بين الفيتامينات والبوليسيستين -2، وهي قناة كاتيونية من نوع TRP تحورت في 10-15 ٪ من المرضى الذين يعانون من مرض الكلى متعدد الكيسات السائد الجسدي. أظهرت تجارب الخميرة الهجينة الثنائية والتجارب المنسدلة لضريبة السلع والخدمات أن C - termini من الأشكال المتساوية للفيلمين A و B و C ترتبط مباشرة بكل من N - و C - termini داخل الخلايا من بولي سيستين -2. أظهرت تجارب الترسيب المناعي المشترك المتبادل أن البوليسيستين -2 الداخلي والفيتامينات موجودان في نفس المجمعات في الخلايا الظهارية الكلوية وخلايا الميلانوما A7 البشرية. ثم فحصنا تأثير الفيلامين على وظيفة قناة البولي سيستين -2 من خلال دراسات الفيزيولوجيا الكهربائية مع نظام إعادة تكوين طبقة ثنائية الدهون ووجدنا أن الفيلامين أ يمنع بشكل كبير نشاط قناة البولي سيستين -2. تشير دراستنا إلى أن الفيتامينات هي منظمات مهمة لوظيفة قناة البوليسيستين -2، وتربط ديناميكيات الأكتين الخلوية الهيكلية بتنظيم بروتين القناة هذا.