Le cancer de l'ovaire est l'un des types les plus mortels de malignité féminine. Bien que la plupart des patients soient initialement sensibles à la chimiothérapie à base de platine, presque tous développent des tumeurs chimiorésistantes récurrentes et succombent à leurs maladies. L'élucidation de la pathogenèse sous-jacente à la résistance aux médicaments est fondamentale pour le développement de nouvelles thérapies, conduisant à de meilleurs résultats cliniques chez ces patientes. Nous avons comparé les protéomes de carcinomes séreux de haut grade ovariens post-chimiothérapiques primaires et récurrents appariés de neuf patientes atteintes de cancer de l'ovaire en utilisant le CIEF/Nano-RPLC couplé à la SEP en tandem ESI. Par rapport à leurs tumeurs primaires, plus de la moitié des tumeurs récurrentes exprimaient des niveaux plus élevés de plusieurs protéines, notamment CP, FN1, SYK, CD97, AIF1, WNK1, SERPINA3, APOD, URP2, STAT5B et RELA (NF-kappaB p65), qui ont également été validées par RT-PCR quantitative. Sur la base du dépistage de l'ARNsh pour les gènes régulés à la hausse dans les cellules résistantes au carboplatine in vitro, nous avons constaté que la réduction simultanée de RELA et de STAT5B était la plus efficace pour sensibiliser les cellules tumorales au traitement par le carboplatine. De même, l'inhibiteur NF-kappaB, BMS-345541, et l'inhibiteur STAT5, Dasatinib, ont significativement amélioré la sensibilité cellulaire au carboplatine. De plus, RELA et STAT5 sont connus pour se lier à la région promotrice de Bcl-X, régulant son activité promotrice. À cet égard, une augmentation de l'expression de Bcl-xL a été détectée dans les cellules résistantes au carboplatine. L'expression ectopique combinée de RELA et de STAT5B a augmenté l'activité du promoteur Bcl-xL tandis que le traitement par BMS-345541 et Dasatinib l'a diminuée. L'immunoprécipitation de la chromatine de la région promotrice Bcl-X à l'aide d'un anticorps STAT5 a montré l'induction de segments de liaison à l'ADN RELA et STAT5 à la fois dans les cellules naïves traitées avec une concentration élevée de carboplatine ainsi que dans les cellules résistantes au carboplatine. L'analyse protéomique a identifié RELA et STAT5 comme deux protéines majeures associées à la résistance au carboplatine dans les tumeurs ovariennes. Nos résultats ont en outre montré que les inhibiteurs NF-kappaB et STAT5 pouvaient sensibiliser les cellules résistantes au carboplatine et suggèrent que de tels inhibiteurs peuvent être utilisés au profit des patientes atteintes d'un cancer de l'ovaire récurrent résistant au carboplatine.

El cáncer de ovario es uno de los tipos de neoplasia maligna femenina más letales. Aunque la mayoría de los pacientes responden inicialmente a la quimioterapia basada en platino, casi todos desarrollan tumores quimiorresistentes recurrentes y sucumben a sus enfermedades. La elucidación de la patogénesis subyacente a la resistencia a los medicamentos es fundamental para el desarrollo de nuevas terapias, lo que conduce a mejores resultados clínicos en estas pacientes. Comparamos los proteomas de los carcinomas serosos de alto grado de ovario primarios y recurrentes posteriores a la quimioterapia emparejados de nueve pacientes con cáncer de ovario que usan CIEF/Nano-RPLC junto con ESI-Tandem MS. En comparación con sus tumores primarios, más de la mitad de los tumores recurrentes expresaron niveles más altos de varias proteínas, incluidas CP, FN1, SYK, CD97, AIF1, WNK1, SERPINA3, APOD, URP2, STAT5B y RELA (NF-kappaB p65), que también se validaron mediante RT-PCR cuantitativa. Con base en la detección de ARNhc para los genes regulados al alza en células resistentes al carboplatino in vitro, descubrimos que la inactivación simultánea de RELA y STAT5B fue más efectiva para sensibilizar las células tumorales para el tratamiento con carboplatino. Del mismo modo, el inhibidor de NF-kappaB, BMS-345541, y el inhibidor de STAT5, Dasatinib, mejoraron significativamente la sensibilidad celular al carboplatino. Además, se sabe que tanto RELA como STAT5 se unen a la región promotora de Bcl-X, regulando su actividad promotora. En este sentido, se detectó una expresión aumentada de Bcl-xL en células resistentes al carboplatino. La expresión ectópica combinada de RELA y STAT5B mejoró la actividad del promotor Bcl-xL mientras que el tratamiento con BMS-345541 y Dasatinib la disminuyó. La inmunoprecipitación de cromatina de la región promotora Bcl-X utilizando un anticuerpo STAT5 mostró la inducción de segmentos de unión al ADN RELA y STAT5 tanto en células vírgenes tratadas con una alta concentración de carboplatino como en células resistentes al carboplatino. El análisis proteómico identificó RELA y STAT5 como dos proteínas principales asociadas con la resistencia al carboplatino en tumores de ovario. Nuestros resultados mostraron además que el NF-kappaB y el inhibidor de STAT5 podrían sensibilizar las células resistentes al carboplatino y sugieren que dichos inhibidores pueden usarse para beneficiar a las pacientes con cáncer de ovario recurrente resistente al carboplatino.

Ovarian cancer is one of the most lethal types of female malignancy. Although most patients are initially responsive to platinum-based chemotherapy, almost all develop recurrent chemoresistant tumors and succumb to their diseases. Elucidating the pathogenesis underlying drug resistance is fundamental to the development of new therapeutics, leading to improved clinical outcomes in these patients.We compared the proteomes of paired primary and recurrent post-chemotherapy ovarian high-grade serous carcinomas from nine ovarian cancer patients using CIEF/Nano-RPLC coupled with ESI-Tandem MS. As compared to their primary tumors, more than half of the recurrent tumors expressed higher levels of several proteins including CP, FN1, SYK, CD97, AIF1, WNK1, SERPINA3, APOD, URP2, STAT5B and RELA (NF-kappaB p65), which were also validated by quantitative RT-PCR. Based on shRNA screening for the upregulated genes in in vitro carboplatin-resistant cells, we found that simultaneous knockdown of RELA and STAT5B was most effective in sensitizing tumor cells for carboplatin treatment. Similarly, the NF-kappaB inhibitor, BMS-345541, and the STAT5 inhibitor, Dasatinib, significantly enhanced cell sensitivity to carboplatin. Moreover, both RELA and STAT5 are known to bind to the promoter region of Bcl-X, regulating its promoter activity. In this regard, augmented Bcl-xL expression was detected in carboplatin-resistant cells. Combined ectopic expression of RELA and STAT5B enhanced Bcl-xL promoter activity while treatment with BMS-345541 and Dasatinib decreased it. Chromatin immunoprecipitation of the Bcl-X promoter region using a STAT5 antibody showed induction of RELA and STAT5 DNA-binding segments both in naïve cells treated with a high concentration of carboplatin as well as in carboplatin-resistant cells.Proteomic analysis identified RELA and STAT5 as two major proteins associated with carboplatin resistance in ovarian tumors. Our results further showed that NF-kappaB and STAT5 inhibitor could sensitize carboplatin-resistant cells and suggest that such inhibitors can be used to benefit patients with carboplatin-resistant recurrent ovarian cancer.

سرطان المبيض هو أحد أكثر أنواع الأورام الخبيثة لدى الإناث فتكًا. على الرغم من أن معظم المرضى يستجيبون في البداية للعلاج الكيميائي القائم على البلاتين، إلا أن جميعهم تقريبًا يصابون بأورام متكررة مقاومة للمواد الكيميائية ويستسلمون لأمراضهم. يعد توضيح التسبب في مقاومة الأدوية الكامنة أمرًا أساسيًا لتطوير علاجات جديدة، مما يؤدي إلى تحسين النتائج السريرية لدى هؤلاء المرضى. قارنا بروتينات السرطانات المصلية الأولية والمتكررة بعد العلاج الكيميائي من تسعة مرضى بسرطان المبيض باستخدام cIEF/Nano - RPLC إلى جانب ESI - Tandem MS. بالمقارنة مع أورامهم الأولية، أعرب أكثر من نصف الأورام المتكررة عن مستويات أعلى من العديد من البروتينات بما في ذلك CP و fn1 و SYK و CD97 و AIF1 و WNK1 و SERPINA3 و APOD و URP2 و STAT5B و RELA (NF - kappaB p65)، والتي تم التحقق من صحتها أيضًا بواسطة RT - PCR الكمي. استنادًا إلى فحص الحمض النووي الريبوزي المتسلسل للجينات المنظمة في الخلايا المقاومة للكاربوبلاتين في المختبر، وجدنا أن الضربة القاضية المتزامنة لـ RELA و STAT5B كانت أكثر فعالية في توعية الخلايا السرطانية للعلاج بالكاربوبلاتين. وبالمثل، عزز مثبط NF - kappaB، BMS -345541، ومثبط STAT5، Dasatinib، حساسية الخلايا للكاربوبلاتين بشكل كبير. علاوة على ذلك، من المعروف أن كل من RELA و STAT5 يرتبطان بمنطقة المروج Bcl - X، وينظمان نشاط المروج. في هذا الصدد، تم الكشف عن تعبير Bcl - xL المعزز في الخلايا المقاومة للكربوبلاتين. أدى التعبير المنتبذ المشترك عن نشاط محفز Bcl - xL المعزز لـ RELA و STAT5B أثناء العلاج بـ BMS -345541 و Dasatinib إلى تقليله. أظهر الترسيب المناعي للكروماتين في منطقة معزز Bcl - X باستخدام الجسم المضاد STAT5 تحريض مقاطع ربط الحمض النووي RELA و STAT5 في كل من الخلايا الساذجة المعالجة بتركيز عالٍ من الكاربوبلاتين وكذلك في الخلايا المقاومة للكاربوبلاتين. حدد التحليل البروتيني RELA و STAT5 كبروتينينينين رئيسيين مرتبطين بمقاومة الكاربوبلاتين في أورام المبيض. أظهرت نتائجنا كذلك أن مثبط NF - kappaB و STAT5 يمكن أن يحسس الخلايا المقاومة للكربوبلاتين ويشير إلى أنه يمكن استخدام هذه المثبطات لصالح المرضى الذين يعانون من سرطان المبيض المتكرر المقاوم للكربوبلاتين.