Baccharis trimera (Less.) DC. (Asteraceae), conocida popularmente como “carqueja”, es una de las plantas medicinales sudamericanas de mayor uso, bajo la forma de infusiones, para el tratamiento de malestares hepato-gástricos. Sin embargo, la bioactividad de su aceite esencial (AE) ha sido poco investigada, al menos algunos de sus componentes bioactivos característicos, los carquejoles, presentan propiedades antipiréticas y analgésicas. El objetivo de este estudio fue evaluar la actividad citotóxica y antiproliferativa in vitro del AE frente a una línea celular cancerígena, y realizar ensayos de inhibición enzimática. El AE fue extraído de las partes aéreas de B. trimera (procedente de Tacuarembó, Uruguay) por arrastre con vapor, y su composición química analizada por GC/MS (fases estacionarias: Rxi-1MS y SE-52MS). Las evaluaciones de bioactividad se realizaron por colorimetría, siguiendo protocolos previamente publicados. El efecto del AE frente a una línea celular de cáncer de pulmón (A549, epitelio alveolar; dosis: 1-300 μg/mL) se evaluó por detección de la enzima lactato deshidrogenasa extracelular (LDH; actividad citotóxica) y mediante la capacidad de reducir a la sal de diazonio WST (actividad antiproliferativa). La inhibición por el AE de la tirosinasa de Agaricus bisporus (modelo con alta homología de la tirosinasa humana) se midió por diferencia de absorbancia (λ 475 nm; 166,7 μg/mL), luego de adicionar L-tirosina como sustrato. El AE mostró una importante abundancia de monoterpenos irregulares, entre ellos acetato de carquejilo (19,5%) y carquejol (9,6%), y terpenos regulares como palustrol (11,5%), β-pineno (4,8%), y β-elemeno (4,5%). El AE fue citotóxico y antiproliferativo frente a A549 (IC50: 160 μg/mL; viabilidad celular 5%), mientras que no inhibió a la tirosinasa a la concentración ensayada. Los resultados obtenidos indican bioactividad citotóxica y antiproliferativa del AE, lo que suscita el interés de evaluar su potencial medicinal mediante la investigación de sus mecanismos de acción en ensayos de genotoxicidad e inmunomodulación.