Se estudiaron las fases de enraizamiento in vitro y aclimatización de Gentiana lutea, L. En los ensayos de enraizamiento el medio de cultivo empleado fue el MS (Murashige y Skoog, 1962) adicionado con auxinas IBA (ácido indolbutírico) y NAA (ácido naftanelacético) en diferentes concentraciones (10, 20 y 40 μM en IBA y 5 y 10 μM en NAA). También se diferenciaron los microbrotes por su tamaño (grande, mediano y pequeño) según ensayo. El material vegetal fue subcultivado en una cámara de incubación a una temperatura de unos 22ºC ± 2ºC y un fotoperiodo de 16 h de luz y 8 h de oscuridad entre 4 y 7 semanas según ensayo. En la fase de aclimatización, los microbrotes fueron trasplantados en bandejas alveolares con diferentes substratos - S1: turba rubia (sphagnum) tamizada y perlita en proporción 2:1 (v/v), S2: turba encalada y S3: turba encalada y tierra natural de genciana en proporción 3:1 (v/v) - y permanecieron bajo condiciones de doble túnel en invernadero o cámara de incubación. Los resultados obtenidos indican que la presencia de IBA en los medios de enraizamiento favorecieron la posterior aclimatización de los microbrotes. La supervivencia del material vegetal en la fase de aclimatización es elevada durante las primeras 5 – 6 semanas. La mejor combinación tamaño microbrote-substrato, en relación a la supervivencia, fue la que combinó tamaño grande y turba, no obstante, el mejor porcentaje de microbrotes aclimatados (enraizados y vivos) se obtuvo en el substrato que contenía tierra natural y con un tamaño de microbrotes pequeño. Sin embargo, los microbrotes aclimatados en turba presentaron un mayor número de hojas, más altura y mayores pesos aéreos, mientras que el substrato que contenía tierra permitió obtener mayor número de raíces.