Después de la revolución científica y tecnológica que atravesó la genética médica en los últimos años, el gran desafío que hoy enfrenta es hacer llegar sus beneficios a todos los estratos de la sociedad. La hemofilia, coagulopatía hereditaria ligada al cromosoma X (X), afecta a uno de cada 5000 varones hemicigotas en todas las poblaciones humanas y muy raramente a las mujeres portadoras. Mutaciones deletéreas en el gen del F8 (187kb, 26 exones) causan hemofilia A (HA) que es cinco veces más frecuente que la hemofilia B (HB) causada por defectos en el F9 (33kb, 8 exones). Esta diversidad de tamaño y complejidad del F8 y F9, y la heterogeneidad de defectos genéticos que los afectan, determinaron que la hemofilia sea una enfermedad modelo para el diagnóstico molecular, para los desarrollos terapéuticos y para los estudios de correlación genotipo-fenotipo. La mutación más importante en hemofilia es la inversión del intrón 22 (Inv22), la causa del 42% de las HA severas (actividad del FVIII:C99%) y cinco como no portadoras (Pc<1%) de GD: en el F8, siete portadoras de HA y dos no portadoras; y en el F9, dos portadoras de HB y tres no portadoras. La caracterización de GD genómicas es escasa en la literatura médica incluyendo a la hemofilia. La amplificación de 38 productos PCR en el F8 en nuestra serie de pacientes con HA severa permitió identificar 10 familias con GD. Cada una de estas GD se caracterizaron aplicando primero abordajes de amplificación de mojones con acercamiento a las rupturas por bipartición, y con estos resultados, diseñando y obteniendo una señal específica de cada GD en el probando hemicigota y secuenciación de Sanger. Si bien el análisis de los puntos de ruptura reveló patrones asociados a inestabilidad cromosómica, secuencias estimuladoras de rupturas de doble o simple cadena y secuencias generadoras de estructuras secundarias en el ADN no se detectaron patrones comunes específicos que se repitieran en todos los casos. El 80% de los casos mostró elementos repetitivos interdispersos (e.g., LINE, Alu, LTR) en por lo menos uno de los puntos de ruptura confirmando la inestabilidad que representa su presencia en el genoma humano. Aplicando el principio de máxima parsimonia fue posible estimar el mecanismo involucrado en el origen de cada una de las 10 GD caracterizadas (notación HGSV, archivo del F8 NM_000132.3). Un caso asociado a MMBIR (microhomology-mediated break induced repair): Ex7_12del c.[787+9445_1903+1662del23013; 787+9454insTGTATCCCA]. Un caso asociado a FoSTeS (fork stalling template switching): Ex1del compleja c.[-3058_143+12715del15914{-3058_-3059insGTCTCG}; 143+12761_143+14363del1602; 143+14363_143+14425inv; 143+14425_143+20543del6118]. Dos casos asociados a NHEJ (non-homologous end joining): Ex3_26del c.[265+1220_*4636del165297;265+1220_265+1221insAG]; y Ex1del-parcial c.[-2047*_16del2067]. Seis casos asociados a MMBIR o secundariamente a NHEJ: Ex24_26del c.[6620_*13083del39118]; Ex10del c.[1443+3589_1537+1841del3147]; Ex6del c.[669+605_787+2590del4535]; Ex7_18del c.[1443+1010_5998+1279del62333]; Ex5_7del c.[601+2979_1009+745del21380]; y Ex1del-68kbdel c.[-66732*_271+11409del78145]. Esta serie de 10 GD del F8 representa la más grande descripta en HA hasta el presente. Los resultados y desarrollos metodológicos presentados en este trabajo demuestran que los beneficios de la genética molecular humana pueden ser aplicados a todos los segmentos sociales en forma costo-efectiva aún en países con restricciones económicas.

Fil: Abelleyro, Miguel Martín. Instituto de Medicina Experimental; Argentina