
Η ακριβής γονιδιακή έκφραση απαιτεί συνεχή έλεγχο των επιπέδων του mRNA. Η αποικοδόμηση του mRNA αποτελεί ρυθμιστικό στοιχείο της γονίδιακής έκφρασης. Στα κύτταρα των θηλαστικών το κύριο μονοπάτι αποικοδόμησης ξεκινά με αποαδενυλίωση, την αφαίρεση δηλαδή των πολύ(Α) ουρών από το 3' άκρο ενός ώριμου mRNA. Η βράχυνση της ουράς καταλύεται από ένζυμα γνωστά ως αποαδενυλάσες. Ο ρόλος της ύπαρξης πολλών τέτοιων ενζύμων που επιτελούν τη συγκεκριμένη διεργασία δεν έχει ακόμη αποσαφηνιστεί. Επιχειρούμε να προσεγγίσουμε το ερώτημα αυτό, αποσιωπώντας τις αποαδενυλάσες και αναλύοντας την επίδρασή της στα επίπεδα έκφρασης επιλεγμένων mRNAs. Στην παρούσα εργασία εξετάστηκε η επίδραση της αποσιώπησης της ανθρώπινης CNOT7 στα επίπεδα έκφρασης επιλεγμένων παραγόντων, στα πλαίσια μιας πρώτης προσπάθειας για τον προσδιορισμό των mRNA-στόχων της κάθε αποαδενυλάσης. Για το σκοπό αυτό, σχεδιάσαμε 5 κατάλληλα shRNAs για την ειδική σίγηση της CNOT7 και με αυτά διαμολύναμε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα Hep2. Με ανοσοαποτύπωση και ποσοτική Real Time PCR ελέγξαμε σε επίπεδο πρωτεϊνών και mRNA αντίστοιχα, την επιτυχία της αποσιώπησης και τα επίπεδα έκφρασης των εξεταζόμενων παραγόντων σε εκχυλίσματα κυττάρων αγρίου τύπου και κυττάρων διαμολυσμένων με τα shRNAs. Σύγκριση των προτύπων έκφρασης μετά από αποσιώπηση της ΟΝΟΤ7με τα αντίστοιχα από την αποσιώπηση άλλων σημαντικών αποαδενυλασών όπως η PARN, φανερώνει κάποια διαφορετικότητα όσων αφορά τουλάχιστον σε ορισμένα mRNAs.
ΑΓΓΕΛΙΟΦΟΡΟ RNA
ΑΓΓΕΛΙΟΦΟΡΟ RNA
| selected citations These citations are derived from selected sources. This is an alternative to the "Influence" indicator, which also reflects the overall/total impact of an article in the research community at large, based on the underlying citation network (diachronically). | 0 | |
| popularity This indicator reflects the "current" impact/attention (the "hype") of an article in the research community at large, based on the underlying citation network. | Average | |
| influence This indicator reflects the overall/total impact of an article in the research community at large, based on the underlying citation network (diachronically). | Average | |
| impulse This indicator reflects the initial momentum of an article directly after its publication, based on the underlying citation network. | Average |
