Neospora caninum causes significant global economic losses due to abortions in cattle. Immunosuppression induced by viral infection worsens neosporosis. However, the innate immune mechanisms in N. caninum and BoAHV-1 co-infections remain unknown. We previouslyshowed an overexpression of toll-like receptor (TLR) 7 and LL-37 human cathelicidin in this co-infection. This study investigated in vitro effects of bovine alpha-herpesvirus-1 (BoAHV-1) infection on TLRs and cathelicidin antimicrobial peptides signaling, and N. caninum replication in co-infected neuronal cells. Human neuroblastoma SH-SY5Y cells were pretreated with chloroquine (inhibitor of endosomal TLRs, 10 µg/ml), imiquimod (agonist of TLR7, 5 µg/ml),sodium butyrate (promoter of endogenous cathelicidin, 4 mM), or subjected to silencing of LL-37 (shLL-37), followed by infection with the reference strains N. caninum NC-1 (MOI: 0.2) and BoAHV-1 Cooper (MOI: 0.1). At 24 h post-infection, gene expression levels of key immune molecules involved in TLR mediated signaling pathways (NF-κβ, MyD88, IRF3, and IRF7) were assessed by RT-qPCR and tachyzoite replication was examined microscopically. The results indicated that N. caninum replication in coinfection with BoAHV-1 was significantly decreased both intracellularly and extracellularly after chloroquine pretreatment and shLL-37 compared to imiquimod and sodium butyrate treatments. This reduction was accompanied in co-infection by a significant increase, with respect to the control, in MyD88 and IRF3 expression (3.9-fold and 5.5- fold, respectively, p<0.05) after chloroquine treatment, and a decrease in IRF3 expression after shLL-37 (0.409-fold, p<0.05). While treatments with imiquimod and sodium butyrate resulted in a significant decrease, with respect to the control, in the expression of three of the four molecules analyzed (NF-κβ: 0.126 and 0.074; MyD88: 0.365 and 0.508; IRF7: 0.078 and 0.01, respectively, p<0.05). These findings highlight the role of TLR7 and LL-37 in co-infection, emphasizing their impact on dynamics. TLR7 and LL-37 regulate BoAHV- 1 replication, promoting N. caninum replication when both pathogens are present.

Fil: Burucúa, Mercedes María. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; Argentina

Fil: Marin, Maia Solange. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Biología; Argentina

Fil: Moore, Dadin Prando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; Argentina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Cs.agrarias. Departamento de Producción Animal; Argentina

Fil: Quintana, Silvina. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Instituto de Investigaciones en Sanidad Producción y Ambiente. - Comisión de Investigaciones Científicas de la Provincia de Buenos Aires. Instituto de Investigaciones en Sanidad Producción y Ambiente; Argentina

Fil: Odeón, Anselmo Carlos. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Cs.agrarias. Departamento de Producción Animal; Argentina

Fil: Plá, Natalia. Universidad Nacional de Mar del Plata. Facultad de Ciencias Agrarias; Argentina

Fil: Cobo, Eduardo Ruben. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina

VII International Meeting of Apicomplexan parasites in farm animals - ApiCOWplexa

Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias