Bacillus methanolicus er en termotolerant, metylotrof, Gram-positiv bakterie som har vist seg å gi høyt utbytte av aminosyrene glutamat og lysin ved overuttrykkelse av gener. Metylotrofi og toleranse mot høy dyrkningstemperatur gjør Bacillus methanolicus høyt ettertraktet i fremtidig bioteknologiske bruksområder ved å gjøre stor-skala kultivering økonomisk og miljøvennlig. Imidlertid er den dårlig utviklede genetiske verktøykassen en begrensende faktor for videre bruk av B. methanolicus i vitenskap, eller som en industrielt anvendelig mikroorganisme. I denne rapporten har et sett av mulige promotorsekvenser, oppdaget ved RNA-sekven- sering av Bacillus methanolicus MGA3, blitt studert. Promotorstyrken ble karakterisert enten ved bruk av et termostabilt, overfoldet grønt fluorescerende protein (sfGFP) eller et riboflavin-produserende operon som rapporteringsgener. Uttrykket fra elleve promotorsekvenser ble estimert og sammenlignet med den konstitutive og ofte brukte metanol dehydrogenasepromotoren (Pmdh) i platekulturer under flere kultiveringsbetingelser. Den antatte glutamat syntase promotoren (PgltAB) ble vist til å være konstitutiv og over dobbelt så sterk som Pmdh. Videre viste hexulose 6-fosfat syntase promotoren (Phps) en 15- ganger økning i riboflavinproduksjonen sammenlignet med PgltAB i mikrobioreaktorkulturer ved bruk av pBV2 som vektor og riboflavin operonet som rapporteringsgener. I tillegg ble fluorescerende proteinuttrykk funnet å være høyere i pBV2-plasmidet sammenlignet med pTH1-plasmidet, noe som motstrider tidligere transkriptomdata. Oppdagelsen av flere mulige promotorer i B. metanolicus med varierende styrke fungerer som en etterlengtet utvidelse av genomverktøyet, da det gir forskere flere muligheter i forskning på synteseveier, og letter videre utvikling av B. methanolicus som en biokatalysator i industriell produksjon.