A doença renal crónica (DRC) é um problema de saúde pública com uma prevalência mundial crescente. Os doentes terminais apresentam uma taxa de mortalidade que excede a da população em geral. A inflamação é uma característica clínica comum dos doentes em terapia de hemodiálise, não havendo, no entanto, um conhecimento claro sobre os mecanismos bioquímicos subjacentes. Foi demonstrado que o procedimento hemodialítico promove a ativação de neutrófilos, com libertação de elastase, podendo desempenhar um papel importante na resposta inflamatória, e no desenvolvimento de stress oxidativo, dois fatores que, em conjunto, podem agravar a anemia e o risco de doenças cardiovasculares, que são a principal causa de mortalidade desta população. A elastase neutrofílica, uma protease capaz de degradar várias proteínas da matriz extracelular, é codificada pelo gene ELANE, que foi associado ao desenvolvimento de várias patologias e ao aumento do risco de desenvolvimento de cancro do pulmão. A presença de mutações e polimorfismos neste gene parecem determinar modificações ao nível da expressão da elastase, promovendo distúrbios proteolíticos. Este trabalho teve como objetivos identificar e avaliar o impacto dos polimorfismos da região promotora do gene ELANE nos níveis circulantes de elastase, a sua associação com alterações hematológicas, inflamatórias, nutricionais e de adequação da diálise, e com o risco de mortalidade na DRC. Para isso, realizou-se um estudo transversal com 123 doentes renais terminais portugueses em hemodiálise. Estudaram-se os polimorfismos no promotor do gene ELANE, por PCR-sequenciação direta. Os níveis plasmáticos de elastase foram determinados por ELISA. Avaliou-se a correlação de cada polimorfismo com vários parâmetros clínicos, marcadores hematológicos e inflamatórios, de metabolismo do ferro, do estado nutricional e de adequação da diálise, recolhidos dos registos dos doentes. Dos cinco polimorfismos já descritos na literatura, identificaram-se três neste grupo de doentes: c.-903T>G, c.-741G>A, e a presença de uma sequência extra de 52 pb. Além disso, identificaram-se dois novos polimorfismos: c.-801G>A, e a presença de um bloco extra, composto pela quarta e pela quinta repetição que compõem a região promotora do gene. Estes polimorfismos não parecem influenciar significativamente os níveis circulantes de elastase, nem o processo inflamatório dos doentes, não apresentando influência sobre o prognóstico da doença.

End-stage renal disease (ESRD) is a growing public health problem with an increasing worldwide prevalence. ESRD patients present a high mortality rate that far exceeds the mortality rate for the non-ESRD population. Inflammation is a common feature of the patients under hemodialysis; however, the mechanisms/factors triggering the inflammatory process are still poorly clarified. It has been recently demonstrated that hemodialysis procedure induces neutrophil activation and elastase release, which might have an important role in the inflammatory process and in the development of oxidative stress, two factors that can increase the anemia and the risk of cardiovascular diseases, which are the leading cause of mortality in this population. Neutrophil elastase, a protease capable of degrading several extracellular matrix proteins, is encoded by ELANE gene that has been shown to be related with the development of several pathologies and with the higher risk of developing lung cancer. The presence of mutations and polymorphisms in this gene appear to influence the level of elastase expression, promoting proteolytic imbalances. This study aimed to identify and assess the impact of polymorphisms of the promoter region of the ELANE gene in the circulating levels of elastase, their association with hematological, inflammatory and nutritional alterations, dialysis adequacy and with mortality in DRC. To accomplish these objectives, we performed a cross-sectional study with 123 ESRD patients on regular hemodialysis. The promoter region of the ELANE gene was screened for all patients using PCR-direct sequencing and elastase quantification was performed by ELISA. We evaluated the correlation of each polymorphism with various clinical and hematological data, inflammatory and iron metabolism markers, nutritional status and dialysis adequacy, collected from patient records. Of the five polymorphisms already described in the literature, we identified three in this group of patients: c.-903T>G, C-741G>A and the presence of an extra sequence of 52 bp. In addition, we identified two new polymorphisms: c.-801G>A and the presence of an extra block composed of the fourth and the fifth repeat that make up the promoter region of the gene. These polymorphisms do not appear to significantly influence circulating levels of elastase or the infl

Mestrado em Bioquímica - Bioquímica Clínica