Introdução: As doenças auto-imunes são, no seu conjunto, altamente incapacitantes e mortais, sobretudo no sexo feminino. Na última década, foi possível associar estas patologias com uma subpopulação de linfócitos T CD4+- Treg - responsável pela manutenção da tolerância periférica através de mecanismos de regulação/supressão imunológica. Atualmente é possivel quantificar as Treg através da deteção do fator de transcrição FoxP3, por citometria de fluxo (CMF). Mais recentemente, alguns autores defendem que a marcação de superfície com a IL-R7α (CD127) poderá substituir a marcação intracelular com FoxP3. Contudo, ainda persistem dúvidas relativamente ao fenótipo que possibilita a sua deteção, de forma mais simples e eficaz. Materiais e Métodos: O projeto inclui 27 amostras de dadores saudáveis e 11 doentes com Artrite Reumatóide. A imunofenotipagem dos linfócitos foi efetuada por CMF , com recurso aos anticorpos anti-CD4 ECD, anti-CD25 FITC, anti-CD127 CY5 (Beckman Coulter) e anti-FoxP3 PE (eBioscience). Resultados: Amostragem de dadores saudáveis - CD4+CD25+FoxP3+3,60±2,30%; CD4+CD25+CD127-/low 4,35±1,82%; CD4+CD25++FoxP3+1,43±0,77%; CD4+CD25++CD127-/low 1,75±0,85%. Amostragem de doentes - CD4+CD25+FoxP3+ 2,37±0,85%;CD4+CD25+CD127-/low 3,90±1,89%; CD4+CD25++FoxP3+ 1,43±0,65%; CD4+CD25++CD127-/low 2,39±1,36%. Não foram observadas diferenças significativas entre os marcadores CD127 e FoxP3, e entre dadores e doentes, com P<0,05. Conclusão: A quantificação da população das Treg recorrendo à marcação de superfície com CD127 poderá ser uma alternativa fiável à utilização de FoxP3. Contudo, as características inerentes à expressão contínua de CD127 e CD25 dificultam o procedimento técnico. Os valores de referência obtidos no estudo revelaram-se inferiores aos descritos na literatura. Fato, que obriga a um aumento de amostragem para uma correta validação da metodologia.

Introduction: Diseases of autoimmune origin are highly disabling and deadly, especially in females. In the last decade, these pathologies were associated to a subpopulation of T CD4+ lymphocytes --Treg – responsible for the peripheral maintenance through regulation/suppression immune mechanisms. It is currently possible to quantify Treg by detection of the FoxP3 transcription factor by flow cytometry (FC). Some authors argue that surface marking with CD127 (IL-R7α), may replace intra-cell marking with FoxP3, although the debate is still on-going. Material and method: The project includes 27 samples of periphery blood from healthy EDTA K3 donors and 11 samples of AR patients. Phenotyping of lymphocytes was performed by FC, using the antibodies anti-CD4 ECD, anti-CD25 FITC, anti-CD127 CY5 (Beckman Coulter) and anti-FoxP3 PE (eBioscience). Results: Healthy donors – CD4+CD25+FoxP3+ 3,60±2,30%; CD4+CD25+CD127-/low 4,35±1,82%; CD4+CD25++FoxP3+ 1,43±0,77%; CD4+CD25++CD127-/low 1,75±0,85%. Patients - CD4+CD25+FoxP3+ 2,37±0,85%; CD4+CD25+CD127-/low 3,90±1,89%; CD4+CD25++FoxP3+ 1,43±0,65%; CD4+CD25++CD127-/low 2,39±1,36%. No significant differences were observed between markers CD127 and FoxP3, and between donors and patients, P<0,05. Conclusion: The quantification of the population of Treg using CD127 may be a reliable alternative to FoxP3. However, the characteristics of the expression of CD127 and CD25 hinder technical procedure. The reference values obtained in the study proved to be lower than those reported in the literature. An increase sampling is necessary for a proper validation of the methodology.

Mestrado em Biologia Molecular e Celular