A Aspergilose invasiva é uma infecção de diagnóstico difícil, conhecida pela sua elevada mortalidade tendo-se convertido numa infecção nosocomial grave e relativamente frequente em pacientes com neoplasias hematológicas. Os principais factores de predisposição incluem neutropenia prolongada, terapia com corticoesteróides e quimioterapia. O diagnóstico conclusivo usualmente requer técnicas invasivas para amostragem dos tecidos afectados o que nem sempre é possível dado o estado debilitado do paciente. Na ausência de um diagnóstico definitivo é iniciada uma terapia empírica. Testes sensíveis e não invasivos para detecção de componentes de Aspergillus spp. têm vindo a ser desenvolvidos, no entanto os resultados não são uniformes. Por outro lado técnicas muito específicas podem não detectar infecções originadas por outras espécies fúngicas. Neste estudo foram monitorizados 171 amostras correspondentes a 41 pacientes transplantados de medula óssea durante o período de Junho a Dezembro de 2005, para detecção de aspergilose invasiva, atravéz da pesquisa do galactomanano por ELISA Platelia Aspergillus Biorad. Foram ainda estudadas 59 amostras de sangue dos mesmos doentes para a detecção de DNA fúngico por PCR, utilizando primers que amplificam a região 18S do rDNA em condições optimizadas de amplificação. O valor da sensibilidade para o teste de PCR foi (42,9%) e da especificidade (87,9%). Testaram-se amostras com valores de galactomanano positivo e negativo por PCR -tempo real utilizando o kit Q-Aspergillus - Nanogen® de modo a poder avaliar o desempenho deste método em amostras de sangue, tendo-se obtido resultados concordantes relativamente às amostras negativas. Verificou-se que a incidência de aspergilose invasiva no período de estudo foi 8,4% sendo este valor calculado com base nos resultados obtidos por Platelia Aspergillus-Biorad. Foram registados os dados clínicos dos pacientes e estes agrupados de acordo com os critérios estabelecidos pela EORCT e MSG para o diagnóstico da Aspergilose invasiva, observou-se alguns pacientes com resultados positivos para pesquisa de galactomano e de DNA fúngico, foram colocados no grupo dos pacientes sem aspergilose invasiva o que implica necessidade de revisão destes critérios. A análise das diferentes co-variáveis para verificar correlação com os valores do Índex do galactomanano, apenas obteve significância estatistica (p>0,05) com a co- variável culturas positivas. Foi monitorizado o ambiente hospitalar da UTM (ar e superfícies) de modo a avaliar quais as espécies fúngicas prevalentes, bem como o nível de contaminação, sendo os resultados obtidos de acordo com o descrito para salas limpas.

Invasive aspergillosis (IA) is an opportunistic mycosis associated with a high mortality rate. Early diagnosis is critical to a favourable outcome, but is difficult to achieve with current methods. The detection of circulating galactomannan (GM) in serum is an important tool diagnosis. In this work will be studied 170 serum samples from 41 patients with haematological disorders from the Bone Marrow Transplant Unit. A commercially available sandwich ELISA (Platellia Aspergillus-Biorad) that detects galactomannan will be used. Will be considered positive cases when GM Index was > 0,5 at least twice. A clinical protocol was established in order to estimate incidence of IA and the main associated factors. The specificity, sensibility value were estimated. Other methods for IA diagnosis (commercially available Real time PCR-Nanogen) were tested for the same samples in order to compare diagnosis level and their applicability to this type of clinical samples DNA from GM positive and negative samples will be tested, using universal primers that amplify the 18 S rDNA. Since the maintenance of good air quality in hospital contributes to reduce incidence of invasive aspergillosis, environmental surveillance of the bone marrow transplant unit will be done, using air sampling and spread plate technique of cotton swabs of the walls, in order to verify the predominant species and the level of contamination.

Tese de mestrado. Biologia (Humana e Ambiente). Universidade de Lisboa, Faculdade de Ciências, 2007