El complejo glicoprotéico de membrana GPIb-IX es un marcador tardío de la diferenciación megacariocítica, que desempeña un papel fundamental durante el proceso de activación plaquetaria cuando es activado por el factor de vonWillebrand (FvW). Se ha propuesto que la interacción del complejo GPIbIX con trombina daría lugar a cambios en la señalización celular que contribuirían a la activación del receptor del fibrinógeno, integrina αIIbβ3. Por otro lado, la tasa de expresión superficial de dicho complejo condiciona la maduración y liberación de plaquetas de megacariocitos maduros y su déficit, cuantitativo o cualitativo, da lugar a fenotipos macrotrombocitopénicos. Sobre lo expuesto, en el presente trabajo hemos propuesto 2 objetivos: 1) estudiar la interacción GPIbIX-trombina y sus consecuencias sobre la activación del receptor del fibrinógeno (integrina αIIbβ3) y 2) estudiar las vías de señalización y las consecuencias funcionales de la expresión del complejo GPIb-IX en la diferenciación megacariocítica. Para analizar las consecuencias de la interacción trombina-GPIb-IX hemos generado células de ovario de hamster chino (CHO) con sobreexpresión estable de los complejos ⍺IIbβ3 y GPIb-IX humanos. Hemos podido determinar que, en presencia de fibrinógeno, la trombina induce la agregación de estas células, de forma dosis-dependiente, debido a la fijación de fibrina polimerizante. Esta respuesta no se observó en células que expresan sólo uno de los dos receptores y fue bloqueada por anticuerpos contra cada uno de estos complejos. Nuestros datos indican que esta reacción no se debe al atrapamiento de las células por la red de fibrina. Por tanto, el complejo GPIb-IX induce una conformación activa de ⍺IIbβ3 (distinta de la que permite fijación de fibrinógeno con alta afinidad) que le permite la fijación de fibrina polimerizante. Para el estudio del segundo objetivo hemos utilizando dos líneas celulares: las celulas Meg-01 megacarioblásticas y las células K562 mielomegacariocíticas. Estas líneas celulares fueron sometidas a diferentes estímulos en los que se ha seguido dos planteamientos: a) Diferenciación megacariocítica inducida mediante tratamiento con diferentes agentes inductores de diferenciación y b) Generación de clones que expresaran las proteínas del complejo GPIb-IX mediante transfecciones estables de cDNAs que codifican las proteínas de este complejo. El tratamiento de células K562 y Meg-01 con estaurosporina (STA), SB 202190 y PMA inducen propiedades fenotípicas megacarioblásticas distintas, siendo la expresión de la subunidad β3 el único rasgo común. Este trabajo muestra, por primera vez, que la STA induce un fenotipo similar al del megacariocito maduro, que incluye la expresión del marcador de diferenciación terminal GPIb-IX, el aumento de ploidía, y la liberación de partículas pseudoplaquetarias. Hemos observado que de alguna manera la sobreexpresión del complejo GPIb-IX está asociada con el proceso de ploidía en la maduración megacariocítica terminal. Los resultados de activación/inhibición de proteína quinasas indican que la expresión de marcadores megacariocíticos es dependiente de la actividad de la ruta de señalización MAP quinasa ERK1/2, mas su activación sostenida no parece ser indispensable en la expresión de estos marcadores. Adicionalmente la fosforilación de ERK1/2 inducida por estaurosporina es en parte dependiente de la ruta PI3K que esta involucrada tanto en la expresión de marcadores diferenciales megacariocíticos y como en la diferenciación terminal mediando poliploidización.

Beca Predoctoral asociada al proyecto BMC 2003-01409 del Ministerio de Educación y Ciencia y de una beca con cargo al proyecto de refrencia 2004 2 OE 263

Leída en la Universidad Autónoma de Madrid. Facultad de Ciencias el 07-18-2008; 152 págs.

Peer reviewed