[ES] Las acciones de la vitamina D (VD3), la triyodotironina (T3) y el ricido todo-trans retinoico (atRA) están mediados por factores de transcripción dependientes de lig!ndo. los denominados receptores nucleares. Estos regulan la transcripción de un gran numero de genes, uniéndose a secuencias específicas en sus regiones reguladoras. Generalmente, estas secuencias están formadas por repeticiones del motivo PuGefrTCA dispuestas en distinta orientación y separadas por un número de nucleótidos variable. En esta tesis. heiiios demostrado que VD3 es un potente antagonista de la actividad transcripcional de la hormona tiroidea y el ácido todo-trans retinoico en células GH4C1, de origen hipofisario. tanto en elementos de respuesta compuestos por palíndromes invertidos (TREpal) como en eleinentos compuestos por repeticiones directas (DRs). En estos últimos. la separación entre los dos motivos determina la actividad transactivadora o transrepresora de VD3. Ainbas actividades tienen lugar a dosis similares de VD3 en células GH4Cl. El efecto inhibidor de VD3. también tiene lugar sobre la activación por ácido retinoico del promotor del gen RARP2 humano, que contiene un elemento de respuesta del tipo DR5 (PRARE). Hemos demostrado que aunque el heterodímero RXRNDR se une eficientemente a este elemento y al elemento TREpal, esta unión es improductiva desde el punto transcripcional. Al contrario que RXRIRAR, el heterodímero RXRNDR no presenta una polaridad definida en el elemento PRARE. Además, in vitro, VDR impide la unión de RXRIRAR y de RXRITR probablemente, debido a la formación de heterodímeros RARNDR y TRNDR sin capacidad de transactivación y unión a estas secuencias. Por otro lado, la sobre-expresión del receptor X de retinoides (RXR) potencia la actividad represora ejercida por VD3 en el proniotor RARP2. Por el contrario, la expresión de EIA, una proteína viral que actúa coino un coactivador en el promotor RARP2, revierte parcialmente el efecto inhibidor de VD3. Estos resultados sugieren que VD3, a través del heterodímero RXRIVDR, interfiere In transactivación por atRA, compitiendo con RXRIRAR por la unión a elementos de respuesia comunes, en los que no es capaz de transactivar, y por la unión a factores (co-activadores) que potencialmente podrían mediar la actividad transcripcional de ainbos ligandos.

[EN] The actions of vitamin D (VD3), triiodothyronine (T3) and retinoic acid (atRA) are mediated by closely related nuclear receptors which act as ligand-dependen1 transcription factors. Nuclear receptors regulate gene expression by binding to specific DNA sequences (HREs) normally localed in [he 5' flankiiig regioiis of the regulated genes. These sequences are composed of repeats of the PuGGnTCA motif arranged with different orientation and spacing. In this Thesis, we show that vitamin D has a potent antagonistic effect on thyroid hormone and retinoic acid-mediated transcriptional activation in pituitary cells (GH4Cl). VD3 markedly reduces the response of T3 and atRA of promoters containing the synthetic element TREpal or direct repeats composed of the motif AGGTCA separated by 4 or 5 nucleotides. The activity ot the RARP2 promoter, which contains a strong retinoic acid response element (PRARE) is increased by at RA in pituitary GH4Cl cells. Incubation with vitamin D significantly decreases the response to atRA. We have shown that RXRIVDR heterodimers bind this element and the TREpal element. However, VD3 does no1 transactivate through these elements. As compared with binding of RXWRAR, binding OS RXWVDR to the PRARE is less stable and does not present a defined polarity. In vitro. VDR displaces binding of T3 and atRA receptors in a dose-dependent manner. Our dain suggest the fonnation of TRNDR and RARNDR heterodimers which have a low affiiiiiy for these response elements and can inhibit binding of more active heterodimers with RXR. On the other hand, the overexpression of RXR potentiates the VD3 antagonistic effect. showing that competition for this receptor, does not cause the inhibitory effect of VDR. The RARP2 promoter appears to require an ElA-like activity for full transcriptional induction by RAR in COS cells. In GH4Cl cells expression of E1A has little stimulatory effect on atRA response but partially reverts the inhibitory response of VD3. These results suggest that VD3 interferes the atRA response by competition for binding to common response elements, as well as by competition for binding to transcriptional mediators or intermediary factors (coactivatorsl which mediate atRA and VD3 actions.

Tesis doctoral inédita leída en la Universidad Autónoma de Madrid, Facultad de Medicina, Departamento de Bioquímica

Peer reviewed