Bacillus thuringiensis (Bt) representa la solución de origen microbiano más utilizada actualmente como alternativa a los insecticidas químicos. Bt es una bacteria Gram-positiva que se caracteriza por producir cristales paraesporales durante su fase esporulativa. Éstos están principalmente compuestos por δ-endotoxinas que resultan tóxicas para un amplio número de insectos, nematodos y ácaros. La producción de la mayoría de las proteínas insecticidas en Bt depende de los principales reguladores de la esporulación (Spo0A, SigK o SigE). Estudios previos demostraron que cuando se suprime la capacidad de formar esporas en Bt, simultáneamente, se compromete la expresión de las δ-endotoxinas. Por este motivo, está generalmente asumido que la producción de cristales paraesporales es un proceso dependiente de la formación de espora. Con el objetivo de encontrar factores de esporulación críticos para la formación de esporas pero prescindibles para la expresión de las proteínas del cristal, realizamos mutagénesis química aleatoria para seleccionar variantes asporígenas que retuviesen la capacidad de formar cristales. Las variaciones genómicas de los candidatos seleccionados fueron identificadas mediante secuenciación masiva. Uno de los candidatos presentaba una mutación puntual en el gen spoIIIAA. Para validar esta mutación, realizamos mutagénesis dirigida en la cepa Bt acristalófora BMB171. El mutante obtenido se complementó con distintos plásmidos productores de δ-endotoxinas. Como resultado, obtuvimos una cepa no formadora de esporas pero capaz de generar cristales paraesporales. Este tipo de descubrimientos, nos permitirán conocer la dependencia de proteínas insecticidas de los distintos determinantes de esporulación y poder así desarrollar mejoras biotecnológicas en los bioinsecticidas basados en Bt.

Resumen del trabajo presentado en el XXVIII Congreso Nacional de la Sociedad Española de Microbiología, celebrado de forma virtual del 28 de junio al 2 de julio de 2021

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