Establecimiento: Para la iniciación de los cultivos se recogieron ramas de la copa de 4 árboles de entre 25-30 años de la Reserva de la Biosfera “Terras do Miño” (R1-R4) y renuevos basales de un árbol de entre 20-25 años que había sido talado en las proximidades de Santiago de Compostela (G1) Las recogidas de material se efectuaron en los meses de noviembre y junio. Las estaquillas se forzaron a brotar en un fitotrón y los ápices y nudos (1 cm) de los brotes desarrollados se utilizaron para establecimiento in vitro una vez esterilizados con hipoclorito sódico al 0.6%. El medio de cultivo está compuesto por las sales y vitaminas de Woody Plant Medium (WPM, Lloyd y McCown 1980), sacarosa 3%, agar Difco 0.7%, 2 mg/l de 6-benciladenina (BA) y 0,5 mg/l de ácido indol acético (AIA). El pH de los medios se ajustó a 5.7 antes de autoclavar. Multiplicación: Se utilizó el medio WPM, realizando 3 ciclos de transferencia a medio fresco de 3 semanas cada uno. Como reguladores de crecimiento se utilizaron BA 0,2 mg /l + AIA 0,5 mg /l en el 1er ciclo, reduciendo la concentración de BA a 0,1 mg/l en el 2º y 3er ciclo y adicionando además 0,5 mg/l de zeatina en el tercero. Como explantos se utilizaron segmentos apicales y basales de los brotes. Los ensayos se realizaron con el clon G1. Los resultados se recogieron al final de los 3 ciclos de transferencias (9 semanas). Enraizamiento: La formación de las raíces adventicias se indujo en brotes de 2-3 cm aislados de los cultivos en multiplicación del clon R4. Se utilizó el medio WPM con los macronutrientes reducidos a la mitad con o sin la adición al medio de 0.1 mg/l de ácido indol butírico (AIB). Los resultados se evaluaron a las 4 semanas. Todos los cultivos se mantuvieron en una cámara con temperatura (25/20ºC día/noche) y fotoperíodo (16/8h) controlado, con una intensidad luminosa de 50-60 µmol m-2 s-1.

Multiplicación: Se ha basado en la proliferación de los brotes axilares. Al igual que sucede con otras especies (San José et al 1990; Vieitez et al 1993) la eficacia de la micropropagación depende del tipo de explanto utilizado, la mejor respuesta tuvo lugar con los explantos basales (nº total de brotes 3.4 frente a 1.8 con los apicales). Aunque algunos autores (Tremblay et al 1986) han utilizado la BA como único regulador de crecimiento para el desarrollo de brotes de Alnus, nosotros obtuvimos una mejora significativa en el desarrollo de los brotes al realizar 3 ciclos de transferencia y añadir zeatina en el tercero. En Fagus sylvatica, se ha señalado que estas transferencias sucesivas aportan nutrientes para el crecimiento de los cultivos, mientras que la combinación de BA y Z favorece el desarrollo in vitro de los brotes y las hojas (Vieitez et al 1993, 2003). Resultados similares obtuvieron con Q. alba y Q. bicolor (Vieitez et al 2009) Enraizamiento: Los resultados obtenidos (80 % de enraizamiento en el control frente a un 66.7% con IBA), muestran la facilidad de enraizamiento del aliso, no siendo necesaria la aplicación de auxina para que tenga lugar la formación de raíces adventicias en los brotes desarrollados in vitro.

En los últimos años se ha detectado una agresiva plaga causada por el hongo Phytophthora alni que está secando miles de alisos en toda Europa. La enfermedad se caracteriza por una lesión necrótica en la raíz y cuello del árbol, con un exudado oscuro en la zona externa, disminución del número y del tamaño de las hojas que presentan un color más amarillento, un incremento de la fructificación y el árbol atacado suele morir rápidamente. Entre las especies de alisos europeos (Alnus glutinosa, A. cordata, A. viridis y A. incana), A. glutinosa es la especie predominante en Galicia y la que presenta una mayor susceptibilidad al ataque del hongo (Webber y Gibbs, 2006).Existe una gran preocupación por el efecto que una sequía masiva de alisos tendría sobre los ecosistemas fluviales, dada la importancia que estas formaciones vegetales tienen en el funcionamiento ecológico de los ríos, como hábitats de especies catalogadas y por los múltiples servicios ambientales y sociales a los que contribuye. Por estos motivos, planteamos en este trabajo el desarrollo de un protocolo para la micropropagación y conservación del aliso como una forma de preservar su diversidad genética.

Establecimiento: Los mejores resultados (100%) se obtuvieron con el clon G1 de origen juvenil, mientras que en el resto de los clones los porcentajes de establecimiento oscilaron entre un 14% (R1, recogida de Junio) y un 75% (R3, recogida de noviembre). El tiempo de estabilización de los cultivos osciló entre 5 meses para el clon G1 y 12 meses para el R1.

Los resultados obtenidos muestran la posibilidad de micropropagar distintos individuos de A. glutinosa como una forma de preservar su diversidad genética que se encuentra amenazada en diferentes puntos de nuestra geografía como consecuencia del ataque del hongo Phytophthora alni.

Trabajo presentado en el Seminario Sobre Biodiversidad Vegetal en el Sistema Agroforestal Atlántico (AGROFOR), celebrado en Pontevedra (España), del 27 al 28 de octubre de 2010

Peer reviewed