Pseudomonas putida es una bacteria de suelo que puede encontrarse en la naturaleza como células móviles individuales o como parte de comunidades sésiles adheridas a sustratos denominadas biofilm. La transición entre ambos estilos de vida está regulado por la proteína FleQ y los niveles intracelulares de di-GMPc. El aislamiento de mutantes de inserción en el gen flhF, defectivos en la formación de biofilm, sugieren la implicación de elementos adicionales en la regulación de este proceso. flhF codifica una GTPasa necesaria para la correcta localización del flagelo, y se encuentra localizado aguas arriba de fleN, que regula el número de flagelos, y fliA, que codifica un factor sigma específico. Con el fin de estudiar el posible papel regulador de estos elementos, se han caracterizado mutantes de deleción en flhF, fleN y un doble mutante flhFfleN. Para ello se han llevado a cabo curvas de crecimiento planctónico y formación de biofilm, ensayos de adhesión y movilidad tipo swimming y swarming. También se han elaborado tinciones de flagelo de todos los mutantes para su posterior visualización al microscopio óptico. Además, se han realizado RT-PCR para el estudio de la organización transcripcional de los genes flhF y fleN, Para estudiar la implicación de estos elementos en regulación de la movilidad y el desarrollo del biofilm, se han realizado ensayos β-galactosidasa de fusiones transcripcionales al gen lacZ de promotores relacionados tanto con la síntesis de flagelo como la formación de biofilm. Los resutados indican que flhA, flhF, fleN y fliA están organizados en un único operón. FleN y FlhF están involucrados en movilidad tipo swimming, pero solo FleN es necesario para la adhesión y formación de biofilm. Por otro lado, ambos genes son necesarios para la movilidad tipo swarming. El análisis de la expresión génica indica que FleN está implicado en la regulación de genes relacionados con movilidad y formación de biofilm. Además, flhF parece estar involucrado en la regulación de, al menos, uno de los promotores flagelares estudiados. Todo ello, sugiere que FleN es un elemento importante en la regulación de la movilidad flagelar y de la adhesión en P. putida.

Resumen del trabajo presentado a la XI Reunión del Grupo de Microbiología Molecular, celebrada en Sevilla del 6 al 8 de septiembre de 2016.

Este trabajo ha sido financiado por los proyectos BIO2010-17853 (MICINN) y BIO2013-42073-P (MINECO).

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