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Conference object . 2017 . Peer-reviewed
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Antibiograma rápido en enterobacterias mediante un método colorimétrico

Authors: March Rosselló, Gabriel Alberto; Gutiérrez-Rodríguez, María Purificación; Simarro-Grande, María; Orduña, Antonio; Bratos Pérez, Miguel Ángel;

Antibiograma rápido en enterobacterias mediante un método colorimétrico

Abstract

[Introducción]: La rapidez en la emisión del antibiograma es una de las prioridades del laboratorio de Microbiología Clínica. La resazurina es un indicador REDOX cuya la forma oxidada es de color azul. Cuando se incuban células no viables en presencia de resazurina, ésta no se reduce y mantiene su color azul; en cambio, las células viables la reducen a resorufina, que es de color rojo. Este cambio de color puede ser detectado a simple vista o mediante espectrofotometría. [Objetivos]: Realizar un antibiograma en enterobacterias mediante el uso de resazurina. [Material y métodos]: Se prepararon suspensiones de Escherichia coli ATCC 35218 a concentraciones de 106, 107 and 108 UFC/ml en 3 ml de caldo Mueller Hinton con los cationes ajustados. La ampicilina se ensayó a las concentraciones críticas de sensibilidad y resistencia propuestos por el EUCAST. Del mismo modo, Escherichia coli ATCC 25922 se testó frente a amicacina, cefotaxima y ciprofloxacino. En todos los casos, se preparó un tubo sin antibiótico como control positivo y otro sin inóculo bacteriano como control negativo. Se observó el color del medio cada 15 minutos de incubación. El cambio de color del medio de azul a rojo indicó crecimiento bacteriano. Además, se calculó el porcentaje de la forma reducida de resazurina a partir de las absorbancias a 570 y 600 nm (Smart Spec™ Plus, Bio‑Rad). [Resultados]: Inóculos de 106, 107 y 108 UFC/ml de Escherichia coli ATCC 35218, resistente a ampicilina, viraron el color del medio, indicando crecimiento bacteriano, durante la tercera, segunda y primera hora de incubación respectivamente, tanto incubados en presencia del antibiótico como sin él. Inóculos 106 UFC/ml de Escherichia coli ATCC 25922, sensible a los antibióticos estudiados, viraron el color del medio durante la tercera hora de incubación sin antibiótico y las cepas incubadas con antibiótico no lo viraron. Del mismo modo, inóculos de 107 UFC/ml viraron el color del medio durante la segunda hora de incubación sin antibiótico y las cepas incubadas con antibiótico no. Finalmente, inóculos de 108 UFC/ml viraron el indicador durante la primera hora de incubación tanto en presencia del antibiótico como sin él. En todos los casos, cuando se observó el viraje del indicador, el porcentaje de reducción de la resazurina, calculado mediante las lecturas espectrofotométricas, fue superior al 17%. [Conclusiones]: En dos horas se puede determinar la sensibilidad de las enterobacterias a los antibióticos mediante el uso de resazurina.

Resumen del póster presentado al XIX Congreso de la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica, celebrado en Sevilla del 28 al 30 de mayo de 2015.

Este trabajo ha sido financiado por una subvención de la Fundación Francisco Soria Melguizo.

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Country
Spain
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