[Objetivo]: El exón 17 de BRCA2 presenta un donador de splicing atípico (GC), su reconocimiento debe estar mediado por motivos reguladores en el intrón 17 y/o el exón 18. Las mutaciones que afecten a estas secuencias podrían alterar el proceso de splicing, y estar asociadas a cáncer de mama y ovario hereditario. Nuestro objetivo es la construcción de un minigen estable, que contenga los exones del 12-20 de BRCA2, para su utilización como herramienta de estudio de mutaciones de splicing en los exones 17 y 18. [Materiales y Métodos]: se analizaron in silico 66 mutaciones para el exón 17 y 145 mutaciones para el exón 18 con los programas NNSplice y HSF, recogidas en las bases de datos BIC y UMD. Las variantes seleccionadas fueron introducidas mediante mutagénesis dirigida en el minigen y transfectadas en células HeLa para observar el efecto de la mutación en el splicing. [Resultados]: hemos realizado la construcción de un minigen estable que incluye desde el exón 12 hasta el 20 de BRCA2 para estudiar mutaciones en los exones 17 y 18 en su contexto genómico. Se seleccionaron 22 mutaciones (10.4%) que fueron ensayadas funcionalmente en el minigen. Estudios previos de nuestro grupo sugieren que existen sitios críticos de regulación que son esenciales para el reconocimiento de los exones 17 y 18 (Acedo A. Tesis Doctoral). Según nuestros resultados, las mutaciones en estas regiones afectan al splicing provocando transcritos anómalos, grandes deleciones e inserciones y exón skipping. [Conclusiones]: Las variantes con impacto en el splicing provocan graves alteraciones en los transcritos generados. El estudio de mutaciones de splicing resulta de vital importancia para la clasificación de variantes con significado clínico desconocido, y los minigenes son una herramienta sencilla y robusta para el estudio de mutaciones que puedan estar afectando a este mecanismo.

Proyectos PI13/01749 (ISCIII, Ministerio de Economía y Competitividad) y CSI090U14 (Consejería de Educación, Junta de Castilla y León), Beca Fundación Villalar 2014 (Castilla y León).

Resumen del póster presentado al XXVIII Congreso Nacional de Genética Humana - AEGH, celebrado en Palma de Mallorca del 13 al 15 de mayo de 2015.

Peer Reviewed