Haemophilus influenzae (Hi) es un miembro habitual del microbioma respiratorio y el patógeno oportunista más frecuentemente aislado en muestras de esputo recogidas durante la exacerbación de pacientes con Enfermedad Pulmonar Obstructiva Crónica (EPOC). El tratamiento de las exacerbaciones implica la administración de antibióticos como Cotrimoxazol (SMX), y la consiguiente adquisición de resistencias. Entre los mecanismos de resistencia a SMX, se encuentra la auxotrofía a timidina asociada a mutaciones en el gen thyA, que codifica una timidilato sintetasa. En un estudio observacional de 2,542 aislados clínicos EPOC de Hi obtenidos entre 2010 y 2014 en el HU Bellvitge (Barcelona), 119 formaron colonias pequeñas con crecimiento lento en placas de Mueller Hinton Fastidioso (MHF), un medio con baja concentración de timidina. El análisis de estos 119 aislados identificó Hi8233, una cepa de un paciente que recibió SMX, auxótrofa natural a timidina, resistente a SMX (SMXR), con una inserción de seis nucleótidos en thyA. Para entender la relación entre auxotrofía a timidina, SMXR e interacción hospedador-patógeno durante la infección respiratoria por Hi, se generaron y caracterizaron los mutantes HiRdKW20ΔthyA y Hi375ΔthyA, en relación a auxotrofía a timidina, SMXR, morfología, crecimiento, auto-agregación, expresión génica, interacción con inmunidad innata, e infección pulmonar. La inactivación del gen thyA genera cepas Hi SMXR y produce auxotrofía a timidina. Esta auxotrofía se revierte en placas de MHF y cultivo líquido por adición de timidina exógena, y genera cambios morfológicos asociados a menor tasa de división, lo que aumenta el tamaño y facilita la auto-agregación bacteriana. La expresión del transportador de nucleósidos nupC aumenta en cepas HiΔthyA, lo que sugiere que la reversión fenotípica por adición de timidina exógena está relacionada con su captación. Asimismo, la auxotrofía a timidina disminuye la adhesióninvasión epitelial, y la carga bacteriana en pulmón y lavado broncoalveolar murino, si bien aumenta el fitness del patógeno en animales sometidos a un régimen terapéutico consistente en la administración oral de SMX. En conjunto, la auxotrofía a timidina en Hi es un mecanismo de SMXR que, concomitantemente, disminuye su capacidad infectiva. Este equilibrio resistencia antibiótica-virulencia debe ser clínicamente considerado en el tratamiento de las exacerbaciones EPOC.

Póster presentado en la XI Reunión del Grupo de Microbiología Molecular de la Sociedad Española de Microbiología (SEM), celebrada en Sevilla del 6 al 8 de septiembre de 2016.

No