[ES] En la mayor?a de los organismos eucariotas con reproducci?n sexual, la recombinaci?n mei?tica es un proceso crucial para la correcta producci?n de gametos. La recombinaci?n mei?tica se inicia con roturas de doble cadena en el DNA (DSBs) que, a?n siendo necesarias para la correcta segregaci?n de los cromosomas en la meiosis, suponen un elevado riesgo para el mantenimiento de la integridad del genoma. Si las c?lulas inician la segregaci?n cromos?mica antes de que estas roturas hayan sido reparadas, los cromosomas o fragmentos de ?stos pueden perderse o segregar incorrectamente. En los organismos eucariotas, existen unos mecanismos de vigilancia o checkpoints que responden a la presencia de DSBs y detienen la progresi?n del ciclo celular para dar tiempo a la c?lula para repararlas. Por tanto, los checkpoints tienen un papel crucial en proteger la integridad gen?mica. Existe un mecanismo de vigilancia espec?fico de la meiosis, denominado checkpoint de recombinaci?n mei?tica o de paquitene, que bloquea la progresi?n de la meiosis en respuesta a fallos mei?ticos, como por ejemplo la presencia de DSBs sin reparar, y asegura la segregaci?n correcta de los cromosomas. Los errores en la segregaci?n mei?tica de cromosomas originan gametos aneuploides que pueden causar diversas patolog?as. La finalidad de este proyecto de tesis ha consistido en entender mejor los mecanismos moleculares que controlan la funci?n del checkpoint de recombinaci?n mei?tica en la levadura de gemaci?n Saccharomyces cerevisiae. Para ello, hemos estudiado la funci?n de la prote?na Ddc2 en el checkpoint de recombinaci?n mei?tica. Ddc2 junto con Mec1 constituyen un complejo sensor del da?o en el DNA en c?lulas vegetativas,. Hemos determinado que Ddc2 participa en el checkpoint de recombinaci?n mei?tica puesto que su deleci?n suprime el bloqueo mei?tico que sufren diferentes mutantes de sinapsis y/o recombinaci?n, como sae2, dmc1, hop2 y zip1, originando productos mei?ticos inviables. La producci?n de Ddc2 se induce en la profase mei?tica y la prote?na se hiperfosforila en respuesta a la acumulaci?n de DSBs sin reparar. Sin embargo, los sitios consenso de fosforilaci?n por Mec1 (S/T-Q) no son necesarios para su funci?n de checkpoint. Mediante estudios de microscop?a de fluorescencia y de inmunoprecipitaci?n de cromatina, hemos demostrado que Ddc2 se localiza en forma de focos m?ltiples, que se acumulan en los mutantes mei?ticos de forma dependiente de RPA se?alizando la presencia de intermediarios de recombinaci?n sin reparar. Adem?s, hemos detectado una localizaci?n alternativa de Ddc2, independiente de la recombinaci?n, en el huso de la profase mei?tica. Se ha descrito que en el mutante sae2 de S. cerevisiae no existe procesamiento nucleol?tico de las DSBs mei?ticas; sin embargo, inesperadamente, hemos observado focos mei?ticos de Ddc2 en sae2 lo que, en principio, implicar?a la existencia de regiones de ssDNA. Diversas evidencias, como la generaci?n de focos de RPA y de BrdU, as? como la activaci?n de la kinasa efectora Mek1 de forma dependiente de Spo11, confirman la formaci?n de ssDNA derivado de DSBs mei?ticas en sae2. Proponemos que una fracci?n de las DSBs mei?ticas generadas se procesa por un mecanismo alternativo independiente de Sae2 y de otras prote?nas descritas hasta el momento implicadas en la resecci?n de DSBs, como Exo1 y Sgs1. Nuestros resultados con el estudio de Ddc2 durante la meiosis en levaduras nos han permitido avanzar en el conocimiento de c?mo el checkpoint de recombinaci?n mei?tica es capaz de detectar la existencia de errores y detener la progresi?n de la meiosis. Puesto que ATRIP, la prote?na hom?loga de Ddc2 en mam?feros, se localiza en cromosomas mei?ticos es probable que esta funci?n est? conservada en la evoluci?n

[EN] In most sexually reproducing eukaryotic organisms, meiotic recombination is a process crucial for proper production of gametes. Meiotic recombination is initiated by double-strand breaks in DNA breaks (DSBs) which, although necessary for the correct segregation of chromosomes at meiosis, pose a high risk for maintaining genome integrity. If cells chromosome segregation start before these cracks have been repaired, chromosomes or fragments thereof may be lost or improperly segregate. In eukaryotic organisms, there are mechanisms or checkpoints surveillance responsive to the presence of DSBs and stop the progression of the cell cycle to allow time for the cell to repair. Therefore, the checkpoints have a crucial role in protecting genomic integrity. There is a specific monitoring mechanism of meiosis, called checkpoint or pachytene meiotic recombination, which blocks the progression of meiosis in meiotic fault response, such as the presence of DSBs unrepaired, and ensures the proper segregation of chromosomes . Errors in meiotic chromosome segregation originate Aneuploid gametes can cause various diseases. The purpose of this thesis has been to better understand the molecular mechanisms that control the function of the meiotic recombination checkpoint in the budding yeast Saccharomyces cerevisiae. To do this, we studied the Ddc2 protein function in meiotic recombination checkpoint. Ddc2 with Mec1 sensor is a complex DNA damage in vegetative cells. We have determined that Ddc2 participates in the meiotic recombination checkpoint since its deletion suppresses blocking meiotic mutants suffer different synapses and / or recombination, as SAE2, dmc1, and zip1 hop2, creating viable meiotic products. Ddc2 production is induced in meiotic prophase and the protein is hyperphosphorylated in response to the accumulation of DSBs unrepaired. However, consensus phosphorylation sites Mec1 (S / TQ) are not required for checkpoint function. By fluorescence microscopy studies and chromatin immunoprecipitation, we demonstrated that locates Ddc2 as multiple foci, which accumulate in meiotic mutants RPA dependently signaling the presence of recombination intermediates unrepaired. Furthermore, we have found an alternative location of Ddc2 independent recombination, on the spindle of meiotic prophase. Described in the mutant S. SAE2 cerevisiae there nucleolytic processing of meiotic DSBs, but unexpectedly, we have observed in outbreaks SAE2 Ddc2 meiotic which in principle implies the existence of regions of ssDNA. Several lines of evidence, including the generation of pockets of RPA and BrdU, and activation of the effector kinase Mek1 Spo11-dependent manner, confirming the formation of ssDNA derivative SAE2 meiotic DSBs. Propose that a fraction of the generated meiotic DSBs are processed by an alternative mechanism independent SAE2 and other proteins described so far involved in resecting DSBs as Exo1 and Sgs1. Our results with the study of Ddc2 during meiosis in yeast have allowed us to advance our knowledge of how the meiotic recombination checkpoint is able to detect the existence of errors and stop the progression of meiosis. Since ATRIP protein Ddc2 counterpart in mammals, is localized in meiotic chromosomes is likely that this function is conserved in evolution