As estradas estão presentes no nosso cotidiano permitindo a ligação entre lugares distantes. No entanto, sua presença cria uma paisagem fragmentada devido à subdivisão de habitats originalmente extensos e contínuos. A fragmentação implica uma perda de área do habitat original e uma nova configuração espacial que expõe a biodiversidade a novas ameaças, representando desafios para sua conservação. Adicionalmente aos efeitos da fragmentação, demonstrou-se que as estradas promovem efeitos negativos em numerosas espécies de animais e plantas. Para afrontar estes efeitos cria-se a necessidade estudar padrões e processos ecológicos decorrentes da presença desta infraestrutura. Neste capítulo analisamos de um ponto de vista Luso-Brasileiro alguns estudos em ecologia de estradas que permitem compreender melhor o impacto das estradas na biodiversidade. Assim, para desenvolver um estudo de ecologia de estradas destacamos a importância de (i) realizar a correta e precisa identificação, classificação e agrupação das espécies mais afetadas dependendo das características biológicas e ecológicas; (ii) determinar os fatores que podem estar influenciando positiva ou negativamente os atropelamentos; (iii) identificar os pontos com maior risco de mortalidade de animais silvestres (hotspots); (iv) avaliar a relação entre características da paisagem e os registros de atropelamentos de vertebrados para gerar modelos preditivos multiescala; (v) e incorporar a conectividade funcional aos modelos de “hotspots” de mortalidade sempre que possível, aumentando assim o seu poder preditivo. Estas informações permitiram mensurar e monitorar o impacto das estradas sobre a fauna, brindando assim com novas informações para medir, entender e mitigar o efeito das estradas sobre a biodiversidade, e propor assim ações de mitigação, que funcionem eficientemente para as espécies ou para grupos de espécies. Destacamos que é igualmente importante a manutenção e monitoramento das medidas de mitigação para um funcionamento efetivo.