TGF-β signalling regulates various cellular activities throughout development and adulthood. Disruptions in the TGF-β signalling cascade are associated with several human diseases. SMAD2 is one of the principal effectors of TGF-β signalling. It interacts with various transcription factors, and is extensively regulated by post-translational modifications, such as ubiquitination. However, much remains unknown about the regulation of SMAD2 function. Using a proteomic screen, I identified ubiquitin-specific peptidase 11 (USP11) as a novel SMAD2 interactor. I confirmed their mutual interaction, and showed that USP11 specifically interacts with the linker domain of SMAD2, but did not appear to regulate either its stability or ubiquitination pattern. USP11 knockdown decreased TGF-β-mediated gene promoter-reporter activity, whereas USP11 over-expression potentiated it. USP11 knockdown did not, however, affect endogenous gene expression after 2 h TGF-β treatment, as determined by microarray analysis and quantitative reverse transcription PCR. I conclude that although USP11 did not regulate the stability of SMAD2, it might be involved in the regulation of other, currently unresolved, aspects of TGF-β signalling.

La signalisation de TGF-β contrôle des processus cellulaires variés au cours du développement et de l'âge adulte. Des perturbations dans la cascade TGF-β sont associées à plusieurs maladies humaines. SMAD2 est l'un des principaux effecteurs de cette cascade et sa fonction est modulée par des modifications post-traductionnelles comme l'ubiquitination. Cependant, il reste encore plusieurs interrogations à propos de sa modulation. En utilisant une approche protéomique, j'ai identifié la peptidase spécifique de l'ubiquitin -11 (USP11) comme un nouveau partenaire de SMAD2. J'ai confirmé leur interaction et démontré qu'USP11 interagit avec le domaine de liaison de SMAD2, mais n'affecte pas sa stabilité ou son ubiquitination. La suppression d'USP11 par siRNA a diminué l'activité de gène rapporteur de TGF-β, mais n'a pas affecté l'expression des gènes endogènes, comme déterminé à l'aide de puce à ADN et par qPCR. En conclusion, même si USP11 ne contrôle pas la stabilité de SMAD2, il peut être impliqué dans la régulation de la signalisation TGF-β à un autre niveau.

Hebert, Terence (Supervisor2)

Bernard, Daniel (Supervisor1)