Pinus tecunumanii é uma das espécies tropicais mais importantes do gênero Pinus no Brasil. Este trabalho teve por objetivo desenvolver um protocolo de micropropagação para Pinus tecunumanii a partir de gemas apicais de plantas jovens mantidas em casa de vegetação. Para a assepsia foi avaliado o efeito de 0,05 ou 0,1% de cloreto de mercúrio em combinação com 0 ou 1 g L-1 de fungicida e NaOCl. O efeito de 2 ou 4 µM BA (6-benzil adenina) foi avaliado na multiplicação in vitro ao longo de três subcultivos. O efeito da adição de 1,5 g L-1 de carvão ativado foi avaliado no meio de alongamento. Para o enraizamento, o efeito dos sais WV5 meia força e de 20 g L-1 de sacarose foi avaliado em meio suplementado com 2.68 µM ácido naftaleno acético (ANA) e 0.44 µM BA. A assepsia dos explantes com 0,05% de cloreto de mercúrio, hipoclorito de sódio, com ou sem fungicida foi eficiente no estabelecimento in vitro de até 83,3% dos explantes. Em meio suplementado com 2 ou 4 µM BA ocorreu multiplicação de brotações adventícias e após o terceiro subcultivo, 70,83% dos explantes formaram novos brotos em meio suplementado com 2 µM BA, com uma média de 3,7 novos brotos por explante. Em meio suplementado com carvão ativado foi observado alongamento em 59,76% dos explantes, enquanto no meio sem carvão 33,33% dos explantes alongaram. Foi observado enraizamento em 14,8% dos explantes em meio suplementado com sais WV5.