La leptospirosis es la enfermedad zoonótica más ampliamente distribuida a nivel mundial, la cual es causada por 17 especies de espiroquetas del género Leptospira. Los miembros patógenos de este género bacteriano se relacionan con una amplia gama de hospederos vertebrados, en particular con cánidos, en los cuales pueden generar un amplio abanico de signos clínicos. Dado que se ha identificado que los perros fungen como una unidad centinela que permite identificar el grado de diseminación de estas bacterias en el medio, la vigilancia epidemiológica resulta prioritaria en estos hospederos. Por ello, el objetivo del presente trabajo fue identificar la seropositividad de la leptospirosis en cánidos de libre rango y ferales en una reserva ecológica urbana en la Ciudad de México, y explorar sus implicaciones en salud pública y medicina de la conservación. Se obtuvieron muestras de suero de 19 caninos, a los cuales se realizó la prueba de aglutinación microscópica (MAT, por sus siglas en inglés). El porcentaje de anticuerpos anti–Leptospira spp. en perros ferales fue de 100 % (IC 95 % 82,3–100), con una seroreactividad para tres serovariedades. Este es el primer trabajo realizado que identifica el grado de exposición a Leptospira spp. en perros ferales en México, en particular en una reserva ecológica.