Betametazon, Deksametazon, Prednizolon ve Metilprednizolon büyükbaş hayvanlarda glukokortikoidlere duyarlı çeşitli akut ve kronik hastalıklarda yaygın olarak kullanılan sentetik glukokortikoidlerdir. Glukokortikoidler sütte kalıntı yapmaları sonucu insanlarda ciddi sağlık sorunlarına yol açabilmektedir. Bu çalışmada sütte glukokortikoidlerin belirlenmesine yönelik hassas metodun seçilebilmesi için sıvı-sıvı ekstraksiyon, katı faz ekstraksiyon ve dispersif katı faz ekstraksiyon metotları karşılaştırılmış ve en hassas metot seçilerek valide edilmiştir. Kromatografik ayırım, Agilent XDB-C18 kolonu (150 mm x 4,6 mm, 5µm ) ile gerçekleştirilmiştir. Hedef analitler Diyot Dizi Dedektörü (Diode Array Detector, DAD) ile bütünleşik Agilent 1100 serisi Yüksek Persformanslı Sıvı Kromatografi ( High Performance Liquid Chromatography, HPLC) ile tanımlanmıştır. Betametazon 0.12, 0.3, 0.45 μg/kg seviyesinde analit eklenmiş örneklerin geri alımı %97 ila % 102 arasında, deksametazon 0.12, 0.3, 0.45 μg/kg seviyesinde analit eklenmiş örneklerin geri alımı %97 ila % 102 arasında, metilprednizolon 0.2, 2, 3 μg/kg seviyesinde analit eklenmiş örneklerin geri alımı %94 ila % 100 arasında, prednizolon 0.6, 6, 9 μg/kg seviyesinde analit eklenmiş örneklerin geri alımı %97 ila % 99 arasında değişmiştir.