Introducción: El estetoscopio es la herramienta universal del médico y personal de salud, está en contacto directo con numerosos pacientes y es un posible vector de infecciones asociadas a la atención de salud. El presente estudio buscó determinar la asociación del lavado de manos y la limpieza de estetoscopios con su contaminación. Métodos: Estudio de tipo observacional, descriptivo y transversal. Se cultivó muestras del diafragma de 70 estetoscopios y se aplicó un cuestionario al personal de salud que los utilizaba. Resultados: La contaminación de estetoscopios fue del 90% y el microorganismo más frecuente fue Staphylococcus coagulasa negativo. En el análisis bivariado, se encontró asociación significativa entre la contaminación de estetoscopios, la ausencia de lavado de manos, y la frecuencia de limpieza menor a diez veces al mes. Conclusión: El lavarse las manos y limpiar el estetoscopio más de 10 veces al mes, son factores protectores para evitar la contaminación de los estetoscopios.