O herbicida Roundup é o agrotóxico mais utilizado no mundo, atuando como inibidor do crescimento das plantas daninhas, no entanto seu uso intensivo compromete o ambiente aquático afetando a saúde dos peixes. O presente trabalho teve como objetivo determinar a concentração letal (CL(50-96h)) do herbicida Roundup® em larvas recém-eclodidas de acará-bandeira (Pterophyllum scalare), avaliando a sobrevivência dos organismos. Para tanto, utilizou-se 240 larvas de acará-bandeira, expostas as concentrações crescentes de 0,0; 1,85; 3,7; 7,4; 11,1; 14,8 mg.L-1, todos com quatro repetições com duração de 96 horas. Os resultados foram obtidos pelo método Trimmed Sperman Karber, demonstrando que a CL(50-96h) foi de 9,25 mg.L-1, apresentando limite inferior de 8,325 mg.L-1 e superior de 10,36 mg.L-1, sendo classificado como um xenobiótico moderadamente tóxico para a espécie. Portanto, esse trabalho contribui para a determinação de valores sobre o herbicida Roundup® para espécies nativas da Amazônia.