O objetivo com este trabalho é trazer de forma técnica o método de resfriação e congelação de espermatozoides da espécie equina após a refrigeração por 24 h com quatro diluidores comerciais. A abordagem técnica vai desde os exames que antecedem e comprovam a viabilidade do garanhão para coleta até o descongelamento de amostras. A coleta é realizada por meio de vagina artificial modelo para equinos e manequim para monta do animal. Após a coleta e análise das características macroscópicas (cor, aspecto, odor e volume) e microscópicas (motilidade total, vigor e concentração espermática) do sêmen fresco, será realizado o resfriamento das amostras seminais, à 5 ºC, por 24 h, com os diluentes comerciais. Após esse período, as amostras serão centrifugadas e o pellet será ressuspendido com diluente comercial para congelamento e criopreservado à -196 ºC em palhetas. As palhetas serão descongeladas à 37 ºC para serem usadas em inseminação artificial.