Inseticidas organofosforados, como o clorpirifos, exercem sua toxicidade pela inibição de enzimas esterases, tais como a acetilcolinesterase (AChE) e carboxilesterase (CbE) em insetos e outros animais. Por isso, a avaliação da atividade destas enzimas é amplamente utilizada como biomarcadora da exposição de animais a estes tipos de compostos, em estudos de monitoramento ambiental. No presente estudo, a compreensão desses efeitos foi transmitida a alunos do Programa de Pós-Graduação em Biodiversidade da UNESP, por meio de experimento prático realizado na disciplina de Ecotoxicologia. Esses conceitos foram abordados por meio de uma avaliação comparativa entre os efeitos de inibição in vitro da AChE e da CbE pelo inseticida clorpirifos, em cascudos-marrom (Pterygoplichthys anisitsi) de três faixas diferentes de tamanho (10-14, 15-19 e 20-24 cm). Os resultados indicaram discrepâncias entre os valores de atividade enzimáticas entre os diferentes grupos de peixes. Ainda, animais menores foram mais sensíveis à inibição da AChE pelo clorpirifos, enquanto que os animais maiores foram mais sensíveis à inibição da CbE. Além de contribuir para o aprendizado dos alunos, o estudo trouxe dados inéditos sobre a sensibilidade de esterases de cascudos-marrom ao clorpirifos.