O controle biológico aplicado consiste em liberações em massa de predadores ou parasitoides após a criação laboratorial em larga escala. Avaliar o custo de produção do parasitoide Diachasmimorpha longicaudata para controle biológico de moscas-das-frutas irá fornecer uma ferramenta capaz de auxiliar o planejamento, controle e uma forma de apoiar as empresas quanto as suas tomadas de decisão. Este trabalho teve por objetivo identificar e analisar os custos variáveis de produção do parasitoide D. longicaudata, criado em larvas de Anastrepha fraterculus. Para isso, foi utilizada a ferramenta de Custeio Baseado em Atividade [ABC]. Foi acompanhado o processo produtivo para obter o custo variável total de produção em laboratório de pesquisa e biofábrica de inimigos naturais, localizado em Piracicaba, São Paulo. A capacidade de produção de pupas de A. fraterculus parasitadas por D. longicaudata é de um milhão por semana nesse laboratório, sendo que um milhão de pupas representa 34 L, e um mL contém aproximadamente 30 pupas. O custo variável de produção para produzir um milhão de pupas parasitadas por semana foi de R$ 5.919,65. O custo com mão de obra representa 57% do custo total, enquanto o custo com materiais representa 43%. Portanto, o custo de uma pupa parasitada por D. longicaudata foi de R$ 0,0059 considerando um milhão de pupas por semana. A tomada de decisão do produtor em relação ao controle biológico utilizando D. longicaudata dependerá de estudos prévios sobre o parasitoide e cultura pretendida.