Se describe aquí el proceso de extracción, aislamiento y purificación para obtener un extracto crudo de β-D-glucanos de la seta comestible Pleurotus pulmonarius. A partir de una mezcla de micelio y cuerpos fructíferos del hongo (basidiocarpóforo), se preparó el extracto crudo, del cual se extrajeron β-D-glucanos en fracción acuosa y alcalina. El extracto crudo en fracción alcalina se purificó por diálisis. En la muestra de la mezcla de micelio y cuerpos fructíferos de la seta se detectaron los β-D-glucanos mediante las técnicas de espectroscopía infrarroja por transformada de Fourier y resonancia magnética nuclear de 1H y 13C. Se confirmó la triple hélice característica de su estructura con el método espectrofotométrico del rojo Congo. Los resultados mostraron que los β-D-glucanos representaban el 32,5 % (p/p) en la seta y el 17,10 % (p/p) en el micelio. Se concluyó que la metodología utilizada para la extracción fue eficaz, al confirmarse la presencia de β-D-glucano en un porcentaje elevado en el hongo P. pulmonarius.