L'incapacité des patients atteints de kala-azar insensibles au gluconate d'antimoine sodique (SAG) à éliminer l'infection à Leishmania donovani (LD) malgré le traitement par SAG est en partie due à un dysfonctionnement immunitaire mal défini. Étant donné que les cellules dendritiques (CD) initient généralement une immunité anti-leishmaniale, un rôle des CD dans la clairance aberrante de la LD a été étudié. En conséquence, la régulation de l'activation induite par la SAG des DC murines à la suite d'une infection par des isolats de LD présentant deux phénotypes distincts tels que résistant à l'antimoine (SbRLD) et sensible à l'antimoine (SbSLD) a été comparée in vitro. Contrairement à la SbSLD, l'infection des CD par la SbRLD a induit plus de production d'IL-10 et a inhibé la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires induite par la SAG, la régulation positive des molécules co-stimulantes et les effets leishmanicides. SbRLD a inhibé ces effets du SAG en bloquant l'activation des voies PI3K/AKT et NF-κB. En revanche, le SbSLD n'a pas réussi à bloquer l'activation de la voie PI3K/AKT induite par le SAG (20 µg/ml) ; qui a continué à stimuler la signalisation NF-κB, à induire des effets leishmanicides et à promouvoir l'activation du DC. Notamment, l'incubation prolongée de DC avec SbSLD a également inhibé l'activation induite par la SAG (20 µg/ml) des voies PI3K/AKT et NF-κB et les effets leishmanicides, qui ont été restaurés en augmentant la dose de SAG à 40 µg/ml. En revanche, la SbRLD a inhibé ces événements induits par la SAG, quelle que soit la durée de l'exposition DC à la SbRLD ou la dose de SAG. Il est intéressant de noter que les effets inhibiteurs de la MRPA, transporteur de la cassette de liaison à l'ATP (ABC) exprimant la SbSLD isogénique, sur les effets leishmanicides induits par la SAG imitaient dans une certaine mesure ceux de la SbRLD, bien que la résistance à l'antimoine dans les isolats cliniques de LD soit connue pour être multifactorielle. En outre, NF-κB a été trouvé pour réguler l'expression de la chaîne lourde de la γglutamylcystéine synthétase murine (mγGCShc), probablement un régulateur important de la résistance à l'antimoine. Il est important de noter que SbRLD, mais pas SbSLD, a bloqué l'expression de mγGCS induite par la SAG dans les DC en empêchant la liaison de NF-κB au promoteur mγGCShc. Nos résultats démontrent que SbRLD mais pas SbSLD empêche l'activation DC induite par SAG en supprimant une voie NF-κB dépendante de PI3K et fournissent la preuve d'une interaction hôte-pathogène différentielle médiée par SbRLD et SbSLD.

La incapacidad de los pacientes con kala-azar que no responden al gluconato de antimonio sódico (SAG) para eliminar la infección por Leishmania donovani (LD) a pesar de la terapia SAG se debe en parte a una disfunción inmune mal definida. Dado que las células dendríticas (CD) suelen iniciar la inmunidad antileishmania, se investigó el papel de las CD en la eliminación aberrante de LD. Por consiguiente, se comparó in vitro la regulación de la activación inducida por SAG de DC murinas después de la infección con aislados de LD que exhiben dos fenotipos distintos, tales como resistente al antimonio (SbRLD) y sensible al antimonio (SbSLD). A diferencia de SbSLD, la infección de DC con SbRLD indujo más producción de IL-10 e inhibió la secreción inducida por SAG de citocinas proinflamatorias, la regulación positiva de moléculas coestimuladoras y los efectos leishmanicidas. SbRLD inhibió estos efectos del SAG al bloquear la activación de las vías PI3K/AKT y NF-κB. Por el contrario, SbSLD no pudo bloquear la activación de la vía PI3K/AKT inducida por SAG (20 µg/ml); que continuó estimulando la señalización de NF-κB, induciendo efectos leishmanicidas y promoviendo la activación de DC. En particular, la incubación prolongada de DC con SbSLD también inhibió la activación inducida por SAG (20 µg/ml) de las vías PI3K/AKT y NF-κB y los efectos leishmanicidas, que se restauraron al aumentar la dosis de SAG a 40 µg/ml. Por el contrario, SbRLD inhibió estos eventos inducidos por SAG independientemente de la duración de la exposición de DC a SbRLD o la dosis de SAG. Curiosamente, los efectos inhibidores del transportador MRPA de casete de unión a ATP (ABC) que expresa SbSLD isogénico sobre los efectos leishmanicidas inducidos por SAG imitaron en cierta medida los de SbRLD, aunque se sabe que la resistencia al antimonio en aislados clínicos de LD es multifactorial. Además, se descubrió que NF-κB regula transcripcionalmente la expresión del gen de la cadena pesada de la γglutamilcisteína sintetasa murina (mγGCShc), presumiblemente un regulador importante de la resistencia al antimonio. Es importante destacar que SbRLD, pero no SbSLD, bloqueó la expresión de mγGCS inducida por SAG en DC al evitar la unión de NF-κB al promotor mγGCShc. Nuestros hallazgos demuestran que SbRLD, pero no SbSLD, previene la activación de DC inducida por SAG al suprimir una vía de NF-κB dependiente de PI3K y proporciona la evidencia de una interacción diferencial huésped-patógeno mediada por SbRLD y SbSLD.

The inability of sodium antimony gluconate (SAG)-unresponsive kala-azar patients to clear Leishmania donovani (LD) infection despite SAG therapy is partly due to an ill-defined immune-dysfunction. Since dendritic cells (DCs) typically initiate anti-leishmanial immunity, a role for DCs in aberrant LD clearance was investigated. Accordingly, regulation of SAG-induced activation of murine DCs following infection with LD isolates exhibiting two distinct phenotypes such as antimony-resistant (SbRLD) and antimony-sensitive (SbSLD) was compared in vitro. Unlike SbSLD, infection of DCs with SbRLD induced more IL-10 production and inhibited SAG-induced secretion of proinflammatory cytokines, up-regulation of co-stimulatory molecules and leishmanicidal effects. SbRLD inhibited these effects of SAG by blocking activation of PI3K/AKT and NF-κB pathways. In contrast, SbSLD failed to block activation of SAG (20 µg/ml)-induced PI3K/AKT pathway; which continued to stimulate NF-κB signaling, induce leishmanicidal effects and promote DC activation. Notably, prolonged incubation of DCs with SbSLD also inhibited SAG (20 µg/ml)-induced activation of PI3K/AKT and NF-κB pathways and leishmanicidal effects, which was restored by increasing the dose of SAG to 40 µg/ml. In contrast, SbRLD inhibited these SAG-induced events regardless of duration of DC exposure to SbRLD or dose of SAG. Interestingly, the inhibitory effects of isogenic SbSLD expressing ATP-binding cassette (ABC) transporter MRPA on SAG-induced leishmanicidal effects mimicked that of SbRLD to some extent, although antimony resistance in clinical LD isolates is known to be multifactorial. Furthermore, NF-κB was found to transcriptionally regulate expression of murine γglutamylcysteine synthetase heavy-chain (mγGCShc) gene, presumably an important regulator of antimony resistance. Importantly, SbRLD but not SbSLD blocked SAG-induced mγGCS expression in DCs by preventing NF-κB binding to the mγGCShc promoter. Our findings demonstrate that SbRLD but not SbSLD prevents SAG-induced DC activation by suppressing a PI3K-dependent NF-κB pathway and provide the evidence for differential host-pathogen interaction mediated by SbRLD and SbSLD.

يرجع عدم قدرة مرضى كالازار غير المستجيبين على إزالة عدوى الليشمانيا الدونوفانية (LD) على الرغم من العلاج بالترهل جزئيًا إلى ضعف الوظيفة المناعية. نظرًا لأن الخلايا التغصنية (DCs) تبدأ عادةً مناعة مضادة لليشمانيا، فقد تم التحقيق في دور DCs في إزالة LD الشاذة. وفقًا لذلك، تمت مقارنة تنظيم تنشيط DCs الناجم عن SAG بعد الإصابة بعزلات LD التي تظهر نمطين ظاهريين متميزين مثل مقاومة الأنتيمون (SbRLD) وحساسية الأنتيمون (SbSLD) في المختبر. على عكس SbSLD، أدت إصابة DCs بـ SbRLD إلى زيادة إنتاج IL -10 وتثبيط إفراز السيتوكينات المسببة للالتهابات الناجم عن SAG، وزيادة تنظيم الجزيئات التحفيزية المشتركة وتأثيرات مبيدات الليشمانيات. منعت SbRLD هذه التأثيرات من SAG عن طريق منع تنشيط مسارات PI3K/AKT و NF - κB. على النقيض من ذلك، فشل SbSLD في منع تنشيط مسار PI3K/AKT المستحث بـ SAG (20 ميكروغرام/مل )؛ والذي استمر في تحفيز إشارات NF - κB، وتحفيز تأثيرات مبيدات الليشمانيات وتعزيز تنشيط التيار المستمر. والجدير بالذكر أن الحضانة المطولة للـ DCs مع SbSLD مثبطة أيضًا لـ SAG (20 ميكروغرام/مل) - التنشيط المستحث لمسارات PI3K/AKT و NF - κB وتأثيرات مبيدات الليشمانيات، والتي تم استعادتها عن طريق زيادة جرعة SAG إلى 40 ميكروغرام/مل. في المقابل، منعت SbRLD هذه الأحداث التي يسببها SAG بغض النظر عن مدة تعرض DC لـ SbRLD أو جرعة من SAG. ومن المثير للاهتمام أن التأثيرات المثبطة لـ SbSLD متجانسة المنشأ التي تعبر عن ناقل MRPA المرتبط بـ ATP (ABC) على تأثيرات مبيدات الليشمانيات التي يسببها SAG تحاكي تأثير SbRLD إلى حد ما، على الرغم من أن مقاومة الأنتيمون في عزلات LD السريرية معروفة بأنها متعددة العوامل. علاوة على ذلك، وجد أن NF - κB ينظم بشكل نصي التعبير عن جين تخليق الغلوتاميل سيستين في الفئران (mγGCShc)، ويفترض أنه منظم مهم لمقاومة الأنتيمون. الأهم من ذلك، أن SbRLD ولكن ليس SbSLD منعت تعبير mγGCS الناجم عن SAG في DCs عن طريق منع ربط NF - κB بمروج mγGCShc. توضح النتائج التي توصلنا إليها أن SbRLD وليس SbSLD يمنع تنشيط التيار المستمر الناجم عن SAG من خلال قمع مسار NF - κB المعتمد على PI3K وتقديم الأدلة على التفاعل التفاضلي بين المضيف والممرض بوساطة SbRLD و SbSLD.