La tecnica di Knaffl-Lenz l7 per la titolazione biologica delle droghe digitaliche e stata oggetto di numerose ricerche sperimentali fondamentalmente rivolte ad accrescere la precisione del saggio. Sono stati largamente studiati fattori inerenti all’animale quali il sesso e il peso8, 9, 14, alla tecnica di somministrazione come la velocita di perfusione28, 6, 8, 12; (considerazioni generali in 2, 3, 5), al tipo di anestesia17, 23, alla influenza di tossicita extracardiache8, 12 etc., e sono stati ricercati accorgimenti atti a migliorare la valutazione del punto terminale della titolazione. Essendo la tecnica di Knaffl-Lenz basata sulla utilizzazione della cavia, la maggiore difficolta si incontra infatti nel valutare, senza ricorrere alla ispezione diretta, il momento dell’arresto del cuore e in particolare nel determinare in quale fase della progressiva sintomatologia tossica cardiaca la perfusione possa essere rallentata, allo scopo di evitare sovradosaggi dipendenti dalla latenza d’azione. Vari sono gli accorgimenti proposti per risolvere tale problema, quali la registrazione del polso carotideo23, l’infissione di spilli segnalatori attraverso la parete toracica6, una piccola apertura interessante cute e piani muscolari fino alla pleura23 etc.; essi tuttavia si rivelano inadeguati in particolare quando la tecnica di Knaffl-Lenz e utilizzata per la titolazione delle droghe digitaliche di secondo ordine. Per questo gruppo di farmaci e di fondamentale importanza infatti stabilire con esattezza il punto terminale ed il momento in cui la perfusione deve essere rallentata, dato che la dose letale resulta particolarmente variabile al variare della velocita di somministrazione29, 6.