RESUMO O presente estudo teve como objetivos avaliar o comportamento de clones de Eucalyptus grandis W.Hill ex Maiden x Eucalyptus globulus Labill e Eucalyptus urophylla S.T.Blake x Eucalyptus globulus Labill e o efeito de diferentes introduções in vitro (aos 30, 90 e 150 dias após a poda do ápice das minicepas) na fase de estabelecimento in vitro. As minicepas, fornecedoras dos explantes para a introdução in vitro, foram conduzidas em minijardim clonal semi-hidropônico. Segmentos nodais de 21 clones de Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus e 8 clones de Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus foram coletados, desinfestados e inoculados em meio de cultura MS, suplementado com 0,5 mg L-1 de BAP e 0,1 mg L-1 de ANA. Após 30 dias em cultura, foram feitas as avaliações e concluiu-se que houve variação entre clones, bem como entre introduções in vitro, para as variáveis estudadas, sendo possível o estabelecimento in vitro da maioria dos clones. ABSTRACT The present study aimed to evaluate the behavior of Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus and Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus clones and the effect of different in vitro insertions (at 30, 90 and 150 days after pruning the donor plants) in the in vitro establishment phase. The mini-stump plants, explant providers for the in vitro introductions, were cultivated under an indoor semi-hydroponic clonal mini-hedging. Nodal segment explants of 21 Eucalyptus urophylla x Eucalyptus globulus clones and eight Eucalyptus grandis x Eucalyptus globulus clones were harvested, disinfected and inoculated in an MS culture medium, supplemented with 0.5 mg L-1 of BAP and 0.1 mg L-1 of NAA. After 30 days in culture, evaluations were made and it was concluded that there were variations among the clones, as well as in vitro introductions, for the studied variables, where the in vitro establishment was possible for most clones.