La posibilidad de inhibir de manera diferente la interacción del factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF) con su principal receptor (KDR) y modular así distintos efectos biológicos ha hecho que la búsqueda de nuevos anticuerpos anti-VEGF se mantenga como un área activa de investigación en múltiples laboratorios, paralelamente a la aplicación del Bevacizumab (primer anticuerpo anti-VEGF registrado). En el presente trabajo se desarrolló una estrategia de perturbación epitópica, basada en el uso de una variante del VEGF humano en la que se habían sustituido tres aminoácidos que forman parte del epitopo reconocido por el Bevacizumab, para dirigir la selección de anticuerpos hacia el reconocimiento de otros epitopos. Mediante la aplicación de esta novedosa estrategia de selección se obtuvo un panel de fragmentos de anticuerpo que reconocen específicamente al VEGF nativo, a partir de una biblioteca de anticuerpos de origen humano sobre fagos filamentosos que se construyó como parte de la investigación. Se demostró que esta biblioteca, la primera de su tipo disponible en Cuba, es una fuente de sitios de unión contra múltiples antígenos. Uno de los fragmentos de anticuerpo anti-VEGF se distinguió por su capacidad de bloquear la interacción del VEGF con su receptor KDR y de inhibir la proliferación de células endoteliales humanas dependientes de este factor de crecimiento. Su afinidad moderada por el VEGF impuso el diseño y ejecución de un procedimiento de maduración in vitro de la afinidad. A partir de este proceso se obtuvo un nuevo fragmento de anticuerpo, denominado L3H6, con un incremento de 18 veces en su afinidad por el VEGF humano, y en consecuencia una mayor capacidad para bloquear la unión de este ligando a su receptor. El mapeo funcional de la especificidad molecular de este fragmento de anticuerpo, mediante mutagénesis dirigida del antígeno sobre fagos, condujo a la identificación de un nuevo epitopo neutralizante en el VEGF humano. El fragmento de anticuerpo L3H6 se convierte en una molécula con potencialidades terapéuticas para el tratamiento de enfermedades relacionadas con una angiogénesis patológica, y a su vez puede ser útil como herramienta para profundizar en la comprensión de la relación entre la especificidad fina de los anticuerpos y sus efectos biológicos en este sistema antigénico.

Tesis de Doctorado