The study was carried out to apply technique of flow cytofluorometry for immunofenotyping of sub-populations of B-cells ofperipheral blood in healthy persons and patients with rheumatoid diseases. The samples included 27 healthy donors, 16 patients with rheumatoid arthritis and 9 patients with systemic lupus erythematosus. The peripheral blood of all participants was analyzed for relative number of CD19+B-cells, total population of memory B-cells (CD19+CD27+); unswitched (GD19+IgD+CD27+) and switched (GD19+IgD-CD27+) memory B-cells, naive (CD19+IgD+CD27-) and transitory (CD19+IgD+CD10+CD38++CD27-) B-cells, plasmablasts (CD19+CD38+++IgD-CD27+CD20+) and long-lived plasmatic cells (CD19+CD138+). The sub-populations of B-cells were identified by technique of multicolorflow cytofluorometry using panel of monoclonal antibodies to surface membrane markers of B-lymphocytes. In normal state, relative number (median-Me; interquartile range 25-75 percentiles) of CD19+B-lymphocytes amounted to 9.1 (6.6-11.6)%; CD19+CD27+ memory B-cells 2.2 (1.6-3.3)%; unswitched and switched memory B-cells 10 (6.4-12.7)% and 17.7 (14.9-27.0)%; naive B-cells 65.8 (55.1-73.4)%; transitory B-cells 0.1 (0.1-0.3)%; plasmablasts 7.0 (5.0-9.4)%. The long-lived plasmatic cells in peripheral blood were absent. In patients with rheumatoid arthritis percentage of content of total population ofmemory B-cells were lower than in donors (1.6; 1.00-2.3%; p=0.038). Under systemic lupus erythematosus was detected decreasing of number of naive B-cells (40.2; 19.7-58.2) and increasing of level of switched memory B-cells (34.2; 21.0-52.7) as compared with donors (p=0.003 in both cases). The study established no reliable differences between healthy donors and patients with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus in the rest of sub-populations of B-lymphocytes. The developed technique of multi-parametric flow cytofluorometry can be recommended for studying homeostasis of B-cells ofperipheral blood in healthy persons and patients with auto-immune rheumatoid diseases and also for evaluating and forecasting effectiveness of anti-B-cells therapy.

Цель использовать методику проточной цитофлуорометрии для иммунофенотипирования субпопуляций В-клеток периферической крови у здоровых лиц и больных ревматическими заболеваниями (РЗ). В периферической крови 27 здоровых доноров, 16 пациентов с ревматоидным артритом (РА) и 9 пациентов с системной красной волчанкой (СКВ) изучали относительное количество CD19 +В-клеток, общей популяции В-клеток памяти (CD19 +CD27 +); непереключенных (CD19 +IgD +CD27 +) и переключенных (CD19 +IgD -CD27 +) В-клеток памяти, наивных (CD19 +IgD +CD27 -) и транзиторных (CD19 +IgD +CD10 +CD38 ++CD27 -) В-клеток, плазмобластов (CD19 +CD38 +++IgD -CD27 +CD20 -) и долгоживущих плазматических клеток (CD19 +CD138 +). Субпопуляции В-клеток определялись методом многоцветной проточной цитофлуорометрии с использованием панели моноклональных антител к поверхностным мембранным маркерам В-лимфоцитов. В норме относительное количество (медиана -Ме; интерквартильный размах 25-75 процентили) CD19 +В-лимфоцитов составило 9,1 (6,6-11,6)%; CD19 +CD27 +В-клеток памяти 2,2 (1,6-3,3)%; непереключенных и переключенных В-клеток памяти 10 (6,4-12,7) и 17,7 (14,9-27,0)%; наивных В-клеток 65,8 (55,1-73,4)%; транзиторных 0,1 (0,1-0,3)%; плазмобластов 7,0 (5,0-9,4)%. Долгоживущие плазматические клетки в периферической крови отсутствовали. У больных РА процентное содержание общей популяции В-клеток памяти было ниже, чем у доноров (1,6; 1,00-2,3%, р=0,038). При СКВ отмечено уменьшение количества наивных В-клеток (40,2; 19,7-58,2) и повышение уровня переключенных В-клеток памяти (34,2; 21,0-52,7) по сравнению с донорами (р=0,003 в обоих случаях). Достоверных различий в остальных субпопуляциях В-лимфоцитов между здоровыми донорами и пациентами с РА и СКВ не обнаружено (р>0,05). Разработанную методику многопараметрической проточной цитофлуорометрии можно рекомендовать для изучения гомеостаза В-клеток периферической крови у здоровых лиц и больных аутоиммунными РЗ, а также для оценки и прогнозирования эффективности анти-В-клеточной терапии.