La legislación venezolana sobre leche cruda no acepta la adición de compuestos diferentes a su naturaleza, sin embargo, algunos estudios demuestran la presencia de inhibidores microbianos en leches crudas y procesadas del país. Entre los posibles inhibidores se encuentra la Penicilina G, que puede hallarse en la leche posterior al uso terapéutico en vacas con mastitis. La presencia de este antibiótico en leche, puede causar reacciones alérgicas en personas susceptibles. Por otra parte, contribuye a la resistencia en microorganismos patógenos. En esta investigación se determinó la presencia de Penicilina G en leche pasteurizada elaborada en el estado Zulia. Se analizaron 104 muestras, de 8 marcas comerciales. La determinación del antibiótico se hizo por Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC), utilizando la técnica de extracción con fosfato diácido de amonio y metanol, propuesta por Faría y col en el año 2000. La fase móvil consistió en buffer fosfato - metanol (65:35 v/v). El cromatógrafo líquido estaba equipado con una bomba (sistema isocrático), una columna C18, un detector UV Visible, a una longitud de onda de 230 nm y un integrador Class-Vp. Los resultados indicaron que 1 muestra (0,96%), presentó Penicilina G, en una concentración de 0,95 ppm. Esta baja incidencia pudo deberse al descarte del ordeño del animal bajo tratamiento, o a que se estén utilizando antibióticos diferentes a Penicilina G en el tratamiento de la mastitis. Estos resultados son favorables para la población sensible a la penicilina, consumidora del producto, y para la industria encargada de la producción de alimentos derivados de la leche.