Neste estudo, investigou-se as aplicações da tecnologia de sequenciamento de nova geração e o uso da ferramenta de bioinformática com a finalidade de atingir a contribuição da tecnologia de sequenciamento de nova geração para avanços na ciência e prática clínica, bem como a implementação de ferramentas de bioinformática para análise dos dados gerados pelo sequenciamento de nova geração. O método consiste em uma revisão narrativa da literatura, abrangendo o período de 2003 a 2024 e utilizando artigos científicos e teses. Os resultados evidenciam que o NGS permite sequenciar genomas inteiros ou áreas específicas, identificar variantes genéticas e realizar análises em larga escala. O fluxo de trabalho do NGS inclui etapas como extração de ácidos nucleicos, preparação de bibliotecas e sequenciamento. As principais plataformas de NGS, como Roche/454, Ion Torrent, illumina MiSeq, SOLiD, PacBio e Oxford Nanopore MinION, são discutidas em termos de princípios e aplicações. A análise bioinformática dos dados gerados pelo NGS envolve etapas como verificação de qualidade, alinhamento, chamada de variantes e anotação funcional. As aplicações do NGS incluem medicina de precisão, farmacogenômica, microbiologia, epigenética, metagenômica e estudos de associação genômica ampla. A integração da automação laboratorial com inteligência artificial promete expandir ainda mais as capacidades do NGS. Por fim, as considerações finais destacam a importância do NGS e da bioinformática, bem como os desafios a serem superados, como qualidade de dados e custos.