[ES] La activación de linfocitos T requiere de dos señales: (1) la interacción del receptor de la célula T (TCR) con el péptido antigénico presentado en el complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) y (2) una señal coestimuladora que permite su expansión clonal y diferenciación en células T efectoras. Este trabajo busca optimizar un bioensayo reportero para activar linfocitos T sin antígeno, utilizando un scFv anti-CD3 expresado en la superficie de células estimuladoras, transmitiendo la señal (1) al linfocito. Este bioensayo cocultiva estas células estimuladoras con células T respondedoras Jurkat Triple Parameter Reporter (TPR), genéticamente modificadas para fusionar los factores de transcripción (TF) AP-1, NF-κB y NFAT con las proteínas fluorescentes mCherry, CFP y GFP, respectivamente. El scFv anti-CD3 presenta alta afinidad, produciendo una activación rápida e intensa de estos factores, lo que dificulta la modulación de la respuesta. Para lograr una cinética regulada de la expresión de estos factores, se realizaron mutaciones en el dominio VH del scFv anti-CD3 de alta afinidad y se estudió su capacidad moduladora en las células Jurkat TPR. Los resultados mostraron que la disminución de la afinidad del scFv anti-CD3 no es suficiente para regular los TF en las Jurkat TPR. Este trabajo sugiere la necesidad de implementar estrategias adicionales que permitan seguir mejorando el bioensayo reportero in vitro, para poder estudiar cómo los medicamentos biológicos regulan la función de las moléculas coestimuladoras y coinhibidoras en la modulación de la respuesta inmunitaria

[EN] The activation of T lymphocytes requires two signals: (1) the interaction of the T cell receptor (TCR) with the antigenic peptide presented on the major histocompatibility complex (MHC) and (2) a costimulatory signal that allows their clonal expansion and differentiation into effector T cells. This study aims to optimize a reporter bioassay to activate T lymphocytes without an antigen, using a scFv anti-CD3 expressed on the surface of stimulator cells, delivering signal (1) to the lymphocyte. This bioassay co-cultures these stimulator cells with Jurkat Triple Parameter Reporter (TPR) T cells, which are genetically modified to fuse the transcription factors (TF) AP-1, NF-κB, and NFAT with the fluorescent proteins mCherry, CFP, and GFP, respectively. The scFv anti-CD3 exhibits high affinity, producing a rapid and intense activation of these factors, making it challenging to modulate the response. To achieve regulated kinetics of these factors' expression, mutations were introduced into the VH domain of the high affinity scFv anti-CD3, and its modulatory capacity was studied in Jurkat TPR cells. The results showed that decreasing the affinity of the scFv anti-CD3 is not sufficient to regulate the TFs in Jurkat TPR cells. This study suggests the need for additional strategies to continue improving the in vitro reporter bioassay, to improve the study of how biological drugs regulate the function of costimulatory and coinhibitory molecules in modulating the immune response

31 págs., figuras, tablas, anexos y bibliografía